يرصد اختبار التألق المناعي غير المباشر (indirect immunofluorescence assay, IFA) في المصل المختبَر الأجسامَ المضادة لبكتيريا Coxiella burnetii مسببة حمى كيو (Q fever)، مستعملًا مستضدَّي الطور الأول والطور الثاني. تذكر المنظمة العالمية لصحة الحيوان (WOAH) أن IFA، بصيغته المكيَّفة تألقًا مناعيًا دقيقًا (micro-immunofluorescence)، هو الطريقة الحالية للتشخيص المصلي لحمى كيو في الطب البشري.
المبدأ
يُحصَل على مستضد الطور الثاني بإنماء سلالة Nine Mile المرجعية في مزرعة خلوية، بينما يُستخلص مستضد الطور الأول من طحال حيوانات المختبر. تُوضع تخفيفات مضاعفة من المصل المختبَر على شرائح تألق مناعي بآبار مغلَّفة مسبقًا بمستضد واحد أو بمستضدين.
الإجراء
تُخفَّف الأمصال تسلسليًا من 1/40 إلى 1/640 في محلول PBS، وتُفحص الشرائح تحت مجهر تألقي بتكبير 400 مرة أو أكثر. تكفي معايرة المستضد بثلاثة أمصال معروفة على الأقل، عالية العيار ومتوسطته ومنخفضته، لتحديد التخفيف المناسب لاختبارات التألق المناعي اللاحقة.
قراءة النتيجة
يتكون التفاعل الإيجابي من نقاط صغيرة لامعة على خلفية داكنة، بينما يأخذ التألق غير النوعي عادةً شكل بقع غير منتظمة. تشترط WOAH أن يعطي الشاهد الإيجابي عياره المعروف بفارق لا يتجاوز تخفيفًا واحدًا زيادةً أو نقصانًا.
مقارنة بالاختبارات الأخرى
تضع WOAH اختبار IFA إلى جانب مقايسة الممتز المناعي المرتبط بالإنزيم (ELISA) ضمن الاختبارات الأعلى حساسية التي يُبنى عليها تقييم الحالة المناعية للقطعان بعد التحصين. يجوز فحص الحالات السريرية بـIFA أو ELISA أو اختبار تثبيت المتممة (CFT)، وتعدّ WOAH تحديد خصائص الاختبار المستعمل في الظروف المحلية أمرًا أساسيًا، أي حساسيته ونوعيته ودقته حول نقطة الفصل وقابلية تكرار نتائجه.
حدود الاختبار
يعيب IFA أن نتائجه أقل قابلية للتكرار بين القائمين على الاختبار، ومن ثَمّ بين المختبرات. لم يُصادَق لدى المجترات على تفسير نتائج IFA بوصفها دالة على الشكل الحاد أو الشكل المزمن من العدوى.