أصبح تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) الأداة المختارة لتشخيص حمى كيو (Q fever) التي تسببها بكتيريا Coxiella burnetii، بحسب المنظمة العالمية لصحة الحيوان (WOAH). تعدّ WOAH هذا التفاعل أكثر الأدوات موثوقية في تشخيص حالات الإجهاض المعدية، واختبارًا مفيدًا وموثوقًا لفرز أعداد كبيرة وأنواع متعددة من العينات.
العينة وسلامة العاملين
توصي WOAH، متى أمكن، بجمع المسحات المهبلية يوم الإجهاض أو خلال أقل من 8 أيام بعده، للحد من النتائج السلبية الكاذبة في PCR. توصي WOAH بفحص ثلاث فلقات (cotyledons) مشيمية على الأقل، لأن استعمار المشيمة بـCoxiella قد يكون غير متجانس. يمكن، حمايةً للعاملين في المختبر، تعطيل العينات البيولوجية قبل إجراء PCR بتسخينها عند 90°م مدة 30–60 دقيقة بحسب طبيعتها وحجمها أو وزنها.
المبدأ
يرفع تضخيمُ تسلسلٍ يتكرر في نسخ عديدة داخل جينومات Coxiella حساسيةَ الاختبار. يضيف PCR في الوقت الحقيقي (real-time PCR) وسيلة أخرى للكشف وللقياس الكمي معًا.
ضبط تثبيط التفاعل
توصي WOAH، مع المصفوفات المعقدة، بتقييم قدرة مستخلصات الحمض النووي على تثبيط التفاعل بإضافة شاهد داخلي للحمض النووي (مثل تسلسل GAPDH) أو شاهد خارجي.
تفسير النتيجة وحدوده
تذكر WOAH أن القياس الكمي للبكتيريا يفيد على المسحات المهبلية أو المشيمية لأن المستويات المرتفعة أكثر ارتباطًا بالحالات السريرية. تذكر WOAH أنه لا يمكن الاعتماد على PCR لتحديد حالة العدوى لدى الحيوان بسبب تباين طرح البكتيريا من حيث طرق الطرح واحتمال تقطّعه.
مقارنة بالاختبارات الأخرى
تضع WOAH الكشف المباشر والقياس الكمي بـPCR، إلى جانب مقايسة الممتز المناعي المرتبط بالإنزيم (ELISA) المصلية، في موضع الطريقتين اللتين ينبغي عدّهما المختارتين للتشخيص السريري، مع أنه لا تتوفر حاليًا لحمى كيو أي تقنية معيارية ذهبية (gold standard). يتفوق إظهار العامل الممرض بـPCR، شأنه شأن الصبغ الكيميائي النسيجي المناعي والتهجين في الموضع، في النوعية والحساسية على طرق الصبغ التقليدية.