يتزايد استخدام مقايسات تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) في كشف البريميات (Leptospira spp.) في أنسجة الحيوانات وسوائل أجسامها، وتعزو المنظمة العالمية لصحة الحيوان (WOAH) ذلك إلى حساسيتها المتصوَّرة وقدرتها على تشخيص داء البريميات (leptospirosis) مبكرًا. تتسم مقايسات PCR بالحساسية، غير أن WOAH تعدّ ضبط الجودة ومعالجة العينات فيها أمرين حاسمين يجب تكييفهما مع النسيج أو السائل والنوع الحيواني المفحوص.
ما الذي يكشفه
تنقسم مقايسات PCR إلى فئتين: فئة تستهدف جينات موجودة في البكتيريا عمومًا مثل rrs (جين 16S rRNA) وsecY، وفئة تستهدف جينات مقصورة على البريميات الممرضة مثل lipL21 وlipL32 وlipL41 وligA وligB.
البادئات والمصادقة
صُمّم كثير من مجموعات البادئات (primers) وقُيّم على عينات بشرية لا حيوانية، ولا يوجد اتفاق عام على البادئات الملائمة لعينات الحيوانات، مع أن البادئات القائمة على جين lipL32 هي الأكثر ذكرًا. تعدّ WOAH المصادقة من القضايا العالقة في استخدام PCR لتشخيص داء البريميات لدى الحيوانات، ويتحمل كل مختبر مسؤولية المصادقة على المقايسة التي يستخدمها للنسيج والسائل والنوع المفحوص. بلغ عدد مقايسات PCR في الوقت الحقيقي المصادق عليها حتى الآن ثلاث مقايسات فقط.
ضبط الجودة
تشترط WOAH في ضبط جودة مقايسات PCR المستخدمة لتشخيص داء البريميات استخدامَ عينات ضابطة مناسبة، إلى جانب العناية الدقيقة بتصميم المختبر وسير العمل لمنع تلوث الكواشف.
مقارنة بين صيغتي PCR وبالاختبارات الكيميائية المناعية
يمتاز PCR في الوقت الحقيقي بأنه أسرع من PCR التقليدي وأقل تأثرًا بالتلوث. لا تحدد مقايسات PCR النمط المصلي المسبب للعدوى، شأنها في ذلك شأن الاختبارات الكيميائية المناعية، مع أن بعض مجموعات البادئات قد تتيح التعرف حتى مستوى النوع أو السلالة إذا سُلسلت نواتج التضخيم (amplicons).