تفاعل البوليميراز المتسلسل في تشخيص مرض نيوكاسل

ما الذي يكشفه

تفاعل البوليميراز المتسلسل بالنسخ العكسي (reverse transcription polymerase chain reaction, RT-PCR) هو أكثر الاختبارات الجزيئية استعمالًا في تشخيص فيروس نيوكاسل (Newcastle disease virus, NDV)، وبخاصة في البلدان النامية.

العينة

سهولة المعالجة وقلة المواد العضوية الدخيلة التي قد تعيق استرداد الحمض النووي الريبي (RNA) وتضخيمه: هاتان ميزتان تجعلان المسحات الرغامية أو الفموية البلعومية العينة المختارة في كثير من الأحيان. لكن الاكتفاء بمسحة من موضع واحد لا يُنصح به، فسلالات APMV-1 قد تختلف في الأنسجة التي تنجذب إليها (tropism)، ولذا توصي المنظمة، عند الاعتماد على المسحات، بجمع مسحة فموية بلعومية وأخرى مذرقية وفحص كلتيهما.

المبدأ

وحتى المجموعات التجارية لا تُعفي من العناية باختيار نظام استخلاص RNA الأنسب أو المصادق عليه، لأن هذا النظام يؤثر هو الآخر في نجاح RT-PCR على العينات السريرية. وتصف المراجع العلمية أنواعًا أخرى من الاختبارات الجزيئية، منها مقايسات التضخيم متساوي الحرارة بوساطة الحلقة بعد النسخ العكسي (RT-LAMP).

متى يُستخدم

يدخل تحديد تسلسل موقع الانشطار في البروتين F0 في تعريف مرض نيوكاسل، وقد يدل هذا التسلسل دلالة واضحة على ضراوة الفيروس.

تفسير النتيجة

قد تكون النتيجة السلبية في الاختبارات الجينية كاذبة بسبب التباين الجيني بين عزلات APMV-1، وهو احتمال ينبغي النظر فيه بعناية ما دام الاختبار لم يثبت شموله (inclusivity) لهذا التباين. وعزلات طيور الغاق (cormorants) مثال من الولايات المتحدة على فيروسات لا تتعرف عليها المقايسة القياسية المستعملة لسائر فيروسات APMV-1 شديدة الضراوة (velogenic)، ولذلك يلزم هناك اختبار RT-PCR منفصل لكشفها.