ما الذي يكشفه أو يقيسه
يحدد هذا الاختبار وجود الحمض النووي الريبي (RNA) للفيروسات الليسّية (lyssaviruses) أو غيابه في العينات المشتبه بها، وتتيح منصات التفاعل في الزمن الحقيقي (real-time PCR) الوصول إلى هذا الحكم بسرعة أكبر حيثما سمحت إمكانات المختبر.
المبدأ
تعتمد الصيغة الموصوفة صبغة دنا متألقة (fluorescent DNA stain) نظامًا للكشف، أما قدرتها على كشف جميع الفيروسات الليسّية فمصدرها نوعية البادئات الشاملة للفيروسات الليسّية (pan-lyssavirus primers). ويُدرَج في كل تشغيل شاهد إيجابي معايَر من RNA فيروس داء الكلب (rabies virus, RABV)، ويمكن الاستعانة باختبار داخلي لبيتا-أكتين (beta-actin) شاهدًا على جودة الاستخلاص.
تفسير النتيجة
تتفوق الصيغة المعتمدة على الصبغة المتألقة على الاختبار التقليدي من جهتين:
- الحساسية، إذ تزيد بنحو لوغاريتم واحد على اختبار RT-PCR التقليدي شبه المتداخل (hemi-nested)؛
- وزمن إصدار النتيجة، الذي ينخفض انخفاضًا ملحوظًا.
وأظهر جهاز PCR آني محمول يعمل بالبطارية ويعتمد على رقاقة (Truenat)، في دراسة تجريبية أُجريت في الهند على عينات دماغ حيوانية، دقة تشخيصية بلغت 95.8% مع حساسية 92.3% ونوعية 100%، مقارنة باختبار التألق المناعي (FAT).
متى يُستخدم
حين يكثر عدد العينات، يعطي RT-PCR بصيغتيه التقليدية والآنية نتائج سريعة، شريطة أن يكون المختبر مجهزًا لذلك خصيصًا. وتنضم صيغه الشاملة للفيروسات الليسّية (pan-lyssavirus RT-PCR) إلى اختبار التألق المناعي المباشر (DFA) والاختبار الكيميائي النسيجي المناعي السريع المباشر (dRIT) في قائمة الاختبارات التشخيصية الأولية المفضلة لكشف العامل الممرض في داء الكلب (rabies).