طرق التلوين لكشف البروسيلات

ما الذي يكشفه أو يقيسه

تبحث طرق التلوين عن البروسيلات في لطاخات الأعضاء أو السوائل الحيوية، وهي عصيات مكوَّرة (coccobacilli) أو عصيات قصيرة طولها بين 0.6 و1.5 ميكرومتر وعرضها بين 0.5 و0.7 ميكرومتر، تنتظم فرادى في الغالب، وأقل من ذلك أزواجاً أو مجموعات صغيرة. والبروسيلات سلبية الغرام لا يظهر فيها عادةً التلوين ثنائي القطب (bipolar staining)، وهي غير متحركة، لا تكوّن أبواغاً ولا تنتج أهداباً (pili) أو محافظ حقيقية.

المبدأ

ليست البروسيلات مقاومة للحمض (acid-fast) حقاً، لكنها تقاوم إزالة اللون بالأحماض الضعيفة، فتصطبغ بالأحمر بطريقة Stamp المعدَّلة عن طريقة زيل-نيلسن (Ziehl-Neelsen) وتظهر على خلفية زرقاء في اللطاخات المثبتة مسبقاً بالحرارة أو الإيثانول. ويمكن أيضاً استخدام تقنية تقوم على أجسام مضادة مقترنة بصبغة متألقة (fluorochrome) أو موسومة بالبيروكسيداز (peroxidase).

العينة

يمكن كشف B. abortus بالفحص المجهري في لطاخات تُحضَّر من الأنسجة والإفرازات والنضحات، كالمشيمة والإفرازات المهبلية ومحتويات معدة الجنين، بعد تلوينها بطريقة Stamp.

تفسير النتيجة

يُعدّ وجود كائنات داخل الخلايا ضعيفة المقاومة للحمض وذات شكل البروسيلات، أو كائنات مصبوغة بطريقة مناعية نوعية، دليلاً افتراضياً (presumptive evidence) على داء البروسيلات، ومع ذلك يدعو دليل المنظمة العالمية لصحة الحيوان (WOAH) إلى الحذر في تفسير النتائج الإيجابية بطريقة Stamp لأن كائنات أخرى مسببة للإجهاض، مثل Chlamydia abortus وCoxiella burnetii، قد يصعب تمييزها عن البروسيلات في هذه المستحضرات.