طُوّرت عدة اختبارات من تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) في الوقت الحقيقي تستهدف جينات map1 وmap1-1 ومنطقة pCS20 لكشف كائنات Ehrlichia ruminantium المسببة لمرض الماء القلبي (heartwater). اختُبر تفاعل حديث يستهدف منطقة أخرى من pCS20 على 700 عينة قراد ميدانية من موزمبيق، وسيستخدمه المختبر المرجعي التابع للمنظمة العالمية لصحة الحيوان روتينياً للتشخيص ولمسح القراد.
مقارنة بتفاعل PCR المتداخل
تضاهي حساسية تفاعل pCS20 في الوقت الحقيقي ذي المسبار المتألق حساسيةَ تفاعل PCR المتداخل، عند سبع نسخ لكل عينة. لا يتيح تفاعل PCR المتداخل ولا تفاعل PCR في الوقت الحقيقي كشف E. ruminantium في المجترات الحاملة السليمة رغم فعاليتهما العالية في القراد وفي عينات الطور السريري أو ما بعد النفوق، وتُظهر نتائجهما مع تقنية اللطخة الخطية العكسية (RLB) أن الكشف المباشر في الدم لا يكون موثوقاً إلا خلال الطور الحموي وحوله.
أداء التفاعلات المختلفة
أظهر التفاعل المستهدف لمنطقة pCS20 بمسبار متألق تفاعلاً متصالباً مع E. canis وE. chaffeensis، رغم نجاحه في كشف 15 سلالة مختلفة من E. ruminantium (Steyn et al., 2008). أظهر التفاعل الأحدث المستهدف لمنطقة أخرى من pCS20 تكراريةً وحساسيةً ونوعيةً جيدة بحد كشف 6 نسخ لكل عينة، وكشف 16 سلالة من E. ruminantium من مناطق جغرافية مختلفة (Cangi et al., 2017).
حدود الاستخدام
لا توصي المنظمة العالمية لصحة الحيوان لأغراض التشخيص باختبارات PCR في الوقت الحقيقي التي تستهدف جيني map1 وmap1-1، إذ اختُبرت على عدد محدود من السلالات (حتى ست سلالات)، وبسبب الطبيعة متعددة الأشكال لعائلة map1 متعددة الجينات.
تأكيد حالة الحيوان الحامل
يمكن التحقق من حيوان يُشتبه في حمله العدوى رغم سلبية دمه بتفاعل PCR عبر فحص دفعات من قراد غير مصاب سابقاً بعد تغذيتها على الحيوان، باستخدام تفاعل pCS20 المتداخل أو في الوقت الحقيقي، وتصف المنظمة العالمية لصحة الحيوان هذا الأسلوب بأنه مفيد.