عزل فيروس الحمى القلاعية

ما الذي يكشفه

في عزل الفيروس (virus isolation) تُلقَّح المزارع الخلوية بمعلّقات مُروَّقة من العينات الميدانية التي يُشتبه باحتوائها على فيروس الحمى القلاعية (FMDV)، ويمكن كذلك استرداد الفيروس من العينات السريرية في فئران غير مفطومة، غير أن حقن الحيوانات لا يُشجَّع عمومًا ما لم يتوفر بديل جيد.

العينة

يمكن فحص طيف من العينات بهذه الطريقة أو بـRT-PCR، منها الظهارة وعينات البلعوم الفموي (OP) والحليب والمصل وعضلة القلب من حالات التهاب العضلة القلبية، ويكشف فحص المصل وجود الفيروس في الدم (viraemia). ولأن الغليسرول سام للمزارع الخلوية، تُنشَّف عينة الظهارة بعد إخراجها من محلول PBS والغليسرول على ورق ماص لخفض ما فيها منه، وتوزن. وقد يرتفع معدل كشف الفيروس في سوائل البلعوم الفموي إذا عولجت مسبقًا بحجم مساوٍ لها من مركبات الكلوروفلوروكربون (chloro-fluoro-carbons)، فهذه المعالجة تحرر الفيروس من المعقدات المناعية.

المبدأ

من أنظمة المزارع الحساسة خلايا الغدة الدرقية الأولية للعجول وخلايا الكلى الأولية للخنازير أو العجول أو الحملان، أما السلالات الخلوية الثابتة مثل BHK-21 (كلية الهامستر الوليد) وIB-RS-2 فيمكن استعمالها لكنها أقل حساسية عمومًا من الخلايا الأولية في كشف الكميات الصغيرة من العدوى. وتساعد خلايا IB-RS-2 على تمييز فيروس مرض الخنازير الحويصلي (SVDV) من فيروس الحمى القلاعية، فالأول لا ينمو إلا في خلايا من أصل خنزيري، وكثيرًا ما تكون ضرورية لعزل السلالات المحبة للخنازير (porcinophilic) مثل O Cathay. للمزرعة الخلوية فرصتان، مدة كلٍّ منهما 48 ساعة، لإظهار التأثير الممرض للخلايا (cytopathic effect, CPE): الأولى في المزرعة الملقَّحة أصلًا، والثانية في مزارع جديدة تُلقَّح بخلايا الأولى بعد تجميدها وإذابتها، ولا يُلجأ إليها إلا إذا غاب هذا التأثير في الأولى.

متى يُستخدم

يقارن دليل المنظمة العالمية لصحة الحيوان (WOAH) حساسية تفاعل RT-PCR في الوقت الحقيقي بحساسية عزل الفيروس، ويصفهما بأنهما متقاربتان.

تفسير النتيجة

لا يُكتفى بالعزل: فدليل WOAH يعدّ تأكيد وجود فيروس الحمى القلاعية بعد العزل باختبار نوعي للكشف عن مستضد الفيروس أو حمضه النووي أمرًا ضروريًا، كما يمكن مزيد توصيف العزلة بتحديد التسلسل.