الكشف الجزيئي عن عثة Acarapis woodi (Molecular detection of Acarapis woodi infestation of Apis mellifera) اختبار مخبري قائم على تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR)، وهو إحدى طريقتين تذكرهما المنظمة العالمية لصحة الحيوان (WOAH) لكشف هذه الإصابة، والأخرى هي الفحص المجهري. تصف WOAH العثة المجهرية Acarapis woodi، وهي من عث فصيلة Tarsonemidae، بأنها سبب داء الأكاريوز الرغامي (acarapisosis) في نحل العسل البالغ Apis mellifera وفي أنواع أخرى من جنس Apis.
ما الذي يكشفه الاختبار
جين أوكسيداز السيتوكروم I في Acarapis woodi هو هدف الكشف الجزيئي، ويمكن استعمال PCR التقليدية أو الفورية (real-time) لكشفه، بحسب المنظمة العالمية لصحة الحيوان (WOAH). تقول المنظمة العالمية لصحة الحيوان (WOAH) إن أنثى العثة البالغة يبلغ حجمها نحو 150 ميكرومتراً، وإنها طفيلي داخلي يعيش في الجهاز التنفسي للنحلة. بحسب المنظمة العالمية لصحة الحيوان (WOAH)، تدخل عثة الرغامى القصبات الهوائية الصدرية الأمامية الكبيرة في جميع النحل، وتعيش وتتكاثر فيها في الغالب، وتتغذى على الهيمولمف (دم الحشرة) عند العائل.
العينة
تُؤخذ من الخلية الواحدة عينة من 105 نحلات، وتُنزع بطونها وتُهمل، وفق ما تصفه المنظمة العالمية لصحة الحيوان (WOAH). تصف المنظمة العالمية لصحة الحيوان (WOAH) حجم 105 نحلات لكل خلية بأنه حجم متحفظ، وتضيف أن عينات أصغر يمكن استعمالها إذا كان يُتوقع وجود إصابة كثيفة بالعث. تُقسَّم العينة إلى سبعة مستخلصات DNA منفصلة، في كل منها 15 نحلة تُهرس في محلول التحلل، ثم يخضع الحمض النووي المستخلص لتفاعل PCR. تحدد المنظمة العالمية لصحة الحيوان (WOAH) حداً أقصى قدره 15 نحلة في المستخلص الواحد، وتفيد بأن ذلك يتيح كشف نحلة منفردة تحمل إصابة منخفضة المستوى.
مبدأ الاختبار
يتضمن إجراء الكشف الجزيئي في دليل WOAH رجّ 105 نحلات في ماء دافئ على خلاط مداري مدة 20 دقيقة لإزاحة العث الخارجي. تقوم طريقة PCR الفورية على تضخيم منطقة متغيرة واحدة طولها 113 نيوكليوتيداً في جين أوكسيداز السيتوكروم I الميتوكوندري، وتنسب المنظمة العالمية لصحة الحيوان (WOAH) هذا الوصف إلى دراسة ديلميليو وزملائه عام 2016 للكشف النوعي عن Acarapis woodi. تتوافر لكشف Acarapis woodi طرق PCR تقليدية، لكنها تتطلب تسلسلاً تأكيدياً للمنتجات المضخَّمة (amplicons) لتعزيز الثقة بالكشف. يتيح تسلسل المنتج المضخَّم في طريقة إيفانز وزملائه (2007) التي تعرضها المنظمة العالمية لصحة الحيوان (WOAH) تحديد النوع بين A. woodi وA. externus وA. dorsalis. تضيف المنظمة العالمية لصحة الحيوان (WOAH) أن بادئات PCR المتداخلة (nested) متاحة أيضاً، وقد تعزز حساسية الكشف.
الاستعمالات
لا تقدّم العلامات السريرية في الأكاريوز الرغامي أساساً موثوقاً للتشخيص عند المنظمة العالمية لصحة الحيوان (WOAH)، لأن علامات الإصابة غير نوعية. تحصر المنظمة العالمية لصحة الحيوان (WOAH) كشف الأكاريوز الرغامي في المختبر، بالفحص المجهري أو بالكشف الجزيئي، وتذكر أن الاختبارات المصلية غير متوافرة له. تذكر المنظمة العالمية لصحة الحيوان (WOAH) أن كشف إصابة خلايا النحل بعثة Acarapis woodi بطرق PCR أسرع وأكفأ من الفحص المجهري، وقد يكون أكثر حساسية منه. تصف المنظمة العالمية لصحة الحيوان (WOAH) PCR الفورية بأنها مفيدة عند معالجة أعداد كبيرة من العينات. تضيف المنظمة العالمية لصحة الحيوان (WOAH) أن طرق الكشف المجهرية تتطلب جهداً ووقتاً كبيرين، وبخاصة عند معالجة أعداد كبيرة من العينات.
تفسير النتيجة
يرتبط خطر الإيجابية الكاذبة في PCR، بحسب المنظمة العالمية لصحة الحيوان (WOAH)، بالتشابه الجينومي بين A. woodi والعثتين القريبتين A. dorsalis وA. externus، وهو ما قد يظهر في بعض الأنماط الوراثية النادرة، وتدعو إلى الحذر عند تفسير النتائج. توصي المنظمة العالمية لصحة الحيوان (WOAH) بإجراء اختبار تأكيدي بالفحص المجهري إذا سُجلت نتيجة إيجابية في PCR الفورية ضمن مجموعة من النحل لم يُبلَّغ فيها عن A. woodi من قبل. يُسند الكشف إلى أحد أنواع Acarapis الثلاثة بتسلسل المنتج المضخَّم ومقارنته بتسلسلات مرجعية في قواعد البيانات الوراثية، ولا يكفي حجمه وحده لذلك، بحسب المنظمة العالمية لصحة الحيوان (WOAH).
مكانه في المعايير الدولية
يرمز جدول الملاءمة للغرض في فصل الأكاريوز الرغامي من دليل WOAH إلى PCR الفورية بدرجة «++» أي موصى بها مع وجود قيود في أربع خانات، وبرمز «–» أي غير مناسبة لهذا الغرض في خانتين.