اختبار تثبيت المتممة (CFT) اختبار مصلي يذكر دليل المنظمة العالمية لصحة الحيوان (WOAH) أنه من الطرق التي يمكن بها إظهار الأجسام المضادة لفيروس مرض الخيل الأفريقي، إلى جانب مقايسة الممتز المناعي المرتبط بالإنزيم (ELISA) واللطخة المناعية والتعادل الفيروسي. يعدّ دليل WOAH اختبار تثبيت المتممة أداة مفيدة في المناطق الموبوءة لإظهار الأجسام المضادة من نوع IgM النوعية للمجموعة ضد فيروس مرض الخيل الأفريقي ومعايرتها، ولا سيما بعد عدوى حديثة أو تحصين حديث.
ما الذي يكشفه الاختبار
يصف دليل WOAH مرض الخيل الأفريقي بأنه عدوى فيروسية لا تنتقل بالتماس، تطال كل أنواع الخيليات وتخلّ بوظائف التنفس والدوران، وسببها فيروس orbivirus من فصيلة Reoviridae. تنقل المفصليات مرض الخيل الأفريقي بحسب دليل WOAH، والفيروس المسبب له ذو حمض نووي ريبي مزدوج السلسلة. تظهر لدى الخيل الناجية من العدوى الطبيعية بفيروس مرض الخيل الأفريقي، وفق دليل WOAH، أجسام مضادة موجهة إلى النمط المصلي الذي أصابها خلال 8 إلى 12 يوماً من العدوى. البروتين VP7، كما يذكر دليل WOAH، هو أهم بروتين مستضدي في تركيب فيروس مرض الخيل الأفريقي، ويبقى محفوظاً في الأنماط المصلية التسعة. حدد اختبار التعادل الفيروسي، كما يذكر دليل WOAH، تسعة أنماط مصلية متمايزة مستضدياً لفيروس مرض الخيل الأفريقي، بينها تفاعل متصالب جزئي بين بعض الأزواج، ومن دون تفاعل متصالب مع أي فيروس orbivirus آخر معروف.
العينة
يذكر دليل WOAH أن اختبار تثبيت المتممة استُعمل على نطاق واسع لفيروس مرض الخيل الأفريقي، لكن بعض الأمصال مضادة للمتممة، ولا سيما أمصال الحمير والحمر الوحشية. يذكر دليل WOAH أن مصل حصان سليم خالٍ من الأجسام المضادة يُستعمل مصلاً شاهداً سلبياً في اختبار تثبيت المتممة لمرض الخيل الأفريقي، وأن المصل الشاهد الإيجابي يُحصل عليه محلياً ويُتحقق من صلاحيته.
مبدأ الاختبار
يوضح دليل WOAH أن مستضد اختبار تثبيت المتممة لمرض الخيل الأفريقي مستخلص بالسكروز والأسيتون من دماغ فئران مصابة بالفيروس، وأن المستضد الشاهد هو دماغ فئران غير مصابة يُستخلص بالطريقة ذاتها. ينص دليل WOAH على أنه في غياب مصل قياسي دولي ينبغي معايرة مستضد اختبار تثبيت المتممة لمرض الخيل الأفريقي مقابل مصل شاهد إيجابي محضّر محلياً.
الاستعمالات
يشدد دليل WOAH على ضرورة التشخيص المختبري لمرض الخيل الأفريقي، مشيراً إلى أن علامات المرض السريرية وآفاته المميزة يمكن أن تتشابه مع ما تسببه أمراض خيلية أخرى. يذكر دليل WOAH أن الخيل أشد الفصيلة الخيلية قابلية للإصابة بمرض الخيل الأفريقي بمعدل نفوق يتراوح بين 50 و95%، تليها البغال بمعدل نفوق يقارب 50%. يذكر دليل WOAH أن الحمير في المناطق المتوطنة من أفريقيا شديدة المقاومة لمرض الخيل الأفريقي ولا تصاب إلا بعدوى تحت سريرية. يصف دليل WOAH الحمر الوحشية بأنها مقاومة بوضوح لمرض الخيل الأفريقي، لا تظهر عليها علامات سريرية سوى الحمى، وقد يطول وجود الفيروس في دمها حتى 40 يوماً. يذكر دليل WOAH أن لقاحات حية مضعفة لمرض الخيل الأفريقي، أحادية التكافؤ ومتعددة التكافؤ، متاحة تجارياً حالياً للاستعمال في الخيل والبغال والحمير.
تفسير النتيجة
يذكر دليل WOAH أن نتائج اختبار تثبيت المتممة لمرض الخيل الأفريقي تُقرأ باعتماد انحلال الدم بنسبة 50% نقطةً نهائية، وأن عيار المصل هو مقلوب أعلى تخفيف منه يثبّت المتممة نوعياً مع مستضد الاختبار. يعزو دليل WOAH تراجع اختبار تثبيت المتممة لمرض الخيل الأفريقي إلى حساسية مقايسة ELISA الأعلى ودرجة توحيدها القياسي، وإلى عدد كبير من الأمصال ذات النشاط المضاد للمتممة.
مكانه في المعايير الدولية
يذكر دليل WOAH أن اختبار تثبيت المتممة استُعمل كثيراً في الماضي لمرض الخيل الأفريقي، غير أن استعماله يتراجع حالياً، وقد حلت محله مقايسة ELISA في كثير من المختبرات بوصفها تقنية للمسح. يذكر دليل WOAH أن مقايسة ELISA التنافسية الحاجبة تكشف الأجسام المضادة النوعية لفيروس مرض الخيل الأفريقي الموجودة في أي نوع من الخيليات. يصنّف جدول طرق التشخيص في فصل مرض الخيل الأفريقي من دليل WOAH اختبار تثبيت المتممة بأنه مناسب في ظروف محدودة جداً لكل الأغراض الستة: إثبات خلو مجموعة حيوانية من العدوى، وإثبات خلو الحيوان الفرد قبل نقله، ودعم سياسات الاستئصال، وتأكيد الحالات السريرية، والترصد، وتحديد الحالة المناعية بعد التحصين. يذكر دليل WOAH أنه لا توجد في الوقت الحاضر معايير دولية لفيروسات مرض الخيل الأفريقي أو للكواشف التشخيصية الخاصة به، ولا منهجية قياسية للتعرف على فيروس مرض الخيل الأفريقي. ينبغي، وفق دليل WOAH، أن يُحدَّد مستوى الاحتواء الملائم لأي معالجة مختبرية لفيروس مرض الخيل الأفريقي بتحليل المخاطر الحيوية.