مقايسة الممتز المناعي المرتبط بالإنزيم (ELISA) لكشف الأضداد ضد فيروس الإسهال الفيروسي البقري

مقايسة الممتز المناعي المرتبط بالإنزيم (ELISA) لكشف الأضداد (antibody detection by ELISA) اختبار مصلي يبحث في مصل الأبقار عن الأضداد ضد فيروس الإسهال الفيروسي البقري، ويذكر فصل الإسهال الفيروسي البقري في دليل المنظمة العالمية لصحة الحيوان (WOAH) أنها تُجرى بإحدى الطرق المنشورة أو بعُدد تجارية. يضع دليل WOAH مقايسات ELISA واختبار التعادل الفيروسي في مقدمة الاختبارات المصلية الأوسع استعمالاً لفيروس الإسهال الفيروسي البقري.

ما الذي يكشفه الاختبار

ينتمي فيروس الإسهال الفيروسي البقري، بحسب دليل WOAH، إلى جنس Pestivirus في فصيلة Flaviviridae، وهو فيروس خطي مفرد السلسلة موجب الاتجاه من الحمض النووي الريبي. يذكر دليل WOAH أن الأبقار من جميع الأعمار قابلة للعدوى بفيروسات الإسهال الفيروسي البقري. يذكر دليل WOAH أن مقايسات ELISA المبنية على مستضد من نوع واحد من فيروس الإسهال الفيروسي البقري قد لا تكشف بكفاءة الأضداد التي يحرّضها نوع فيروسي آخر، شأنها في ذلك شأن اختبار التعادل الفيروسي. ينص دليل WOAH على أنه ينبغي اختيار اختبارات الأضداد ضد فيروس الإسهال الفيروسي البقري بحسب قدرتها على كشف الأضداد لطيف الأنماط والسلالات المنتشرة في البلد الذي يُجرى فيه الاختبار. يذكر دليل WOAH أن أضداد النمط 3 من فيروس الإسهال الفيروسي البقري (Pestivirus brazilense) لا تكشفها كل مقايسات ELISA للأضداد بالقدر نفسه، وأن حماية اللقاحات المصممة للنمطين 1 و2 من هذه الفيروسات قد لا تكون كاملة.

العينة

يعدّ دليل WOAH مقايسات ELISA واختبار التعادل الفيروسي مناسبين كليهما للفحص المصلي لفيروس الإسهال الفيروسي البقري، مع أن جودة العينة والتلوث الجرثومي قد يضعفان قدرة اختبار التعادل الفيروسي على كشف الأضداد. يذكر دليل WOAH أن السوائل التامورية أو الجنبية عينات مثالية للفحص المصلي لفيروس الإسهال الفيروسي البقري، في حين يُفضَّل الطحال والرئة لكشف الفيروس نفسه.

مبدأ الاختبار

يجيز دليل WOAH استعمال النوع غير المباشر ونوع الحجب كليهما في مقايسات ELISA لأضداد فيروس الإسهال الفيروسي البقري. يرى دليل WOAH أن الصعوبة الرئيسية في إعداد مقايسة ELISA لأضداد فيروس الإسهال الفيروسي البقري تكمن في تحضير مستضد فيروسي ذي فاعلية كافية، ويذكر تزايد الاعتماد على مستضدات اصطناعية تُنتَج بالتعبير عن جينات فيروسية محددة في أنظمة بكتيرية أو حقيقية النوى. يذكر دليل WOAH أن تقنية التعبير عن جينات فيروسية محددة ينبغي أن تمكّن مستقبلاً من إنتاج اختبارات مصلية مكمّلة للقاحات الوحدات الفرعية أو اللقاحات الواسمة، تميّز الأبقار الملقحة من الأبقار المصابة طبيعياً بفيروس الإسهال الفيروسي البقري. يشترط دليل WOAH إدراج أمصال قياسية شاهدة إيجابية وسلبية في كل اختبار لأضداد فيروس الإسهال الفيروسي البقري، سواء أكان مقايسة ELISA أم اختبار التعادل الفيروسي.

الاستعمالات

يذكر دليل WOAH أن أفضل تأكيد للعدوى الحادة بفيروس الإسهال الفيروسي البقري يكون بإثبات التحول المصلي في عينات مزدوجة متتابعة، يُستحسن أن تؤخذ من عدة حيوانات في المجموعة. ينص دليل WOAH على أنه ينبغي أن يفصل بين عينتي الطور الحاد وطور النقاهة في الفحص المصلي لفيروس الإسهال الفيروسي البقري 21 يوماً على الأقل، وأن تُختبر العينتان معاً في مقايسة واحدة. يذكر دليل WOAH أن مقايسة ELISA للأضداد في عينات الحليب المجمّع يمكن أن تعطي مؤشراً مفيداً على حالة القطيع من الإسهال الفيروسي البقري. يرى دليل WOAH أن الفحص المصلي للأمهات، ولا سيما على مجموعة من الحيوانات، يمكن أن يكون ذا قيمة في معرفة ما إذا كانت عدوى حديثة بفيروس الإسهال الفيروسي البقري قد حدثت في المجموعة. يقصر دليل WOAH دور الفحص المصلي لفيروس الإسهال الفيروسي البقري على إثبات أن الحيوانات السلبية مصلياً لا تمر بعدوى حادة، أو على تحديد الحالة المصلية للثيران المانحة. تلقيح ما يتبقى من الأبقار بعد إزالة الحيوانات المصابة إصابة مستديمة نهجٌ يذكر دليل WOAH أن بعض البلدان الساعية إلى استئصال فيروس الإسهال الفيروسي البقري تتبعه، بهدف إبقاء نسبة الأبقار الإيجابية للأضداد عالية ومنع ظهور إصابات مستديمة جديدة.

تفسير النتيجة

على الدوام تقريباً، يحمل الحيوان الذي نجا من عدوى فيروس الإسهال الفيروسي البقري داخل الرحم في الثلث الأول من الحمل إصابة مستديمة بالفيروس، بحسب دليل WOAH. يذكر دليل WOAH أن الحيوانات المصابة إصابة مستديمة بفيروس الإسهال الفيروسي البقري تبقى كذلك مدى الحياة وتكون في العادة سلبية مصلياً، وأن العجول الصغيرة التي تناولت لبأً يحتوي أضداداً قد تكون من الاستثناءات. عند تعرض حيوان ذي تفيرس دم مستديم بفيروس الإسهال الفيروسي البقري لسلالة مختلفة مستضدياً عن فيروسه المستديم، يذكر دليل WOAH أن نسبة صغيرة من هذه الحيوانات قد تكوّن أضداداً لبعض البروتينات الفيروسية. يذكر دليل WOAH أن مستويات منخفضة من الأضداد قد توجد لدى الحيوانات الأكبر سناً المصابة إصابة مستديمة بفيروس الإسهال الفيروسي البقري، ويعزو ذلك إلى قدرتها على التحول المصلي تجاه سلالات تختلف مستضدياً عن الفيروس المستديم، ومنها سلالات اللقاحات. يخلص دليل WOAH إلى أن الإيجابية المصلية لفيروس الإسهال الفيروسي البقري لا يمكن أن تُعدّ مرادفاً كاملاً لـ«الأمان». يذكر دليل WOAH أن الأبقار الإيجابية مصلياً لفيروس الإسهال الفيروسي البقري والخالية من تفيرس الدم تُعدّ عموماً «آمنة» بشرط ألا تكون حوامل. يذكر دليل WOAH أن الاستجابة المناعية لجنين الأبقار المصاب بفيروس الإسهال الفيروسي البقري وإنتاجه الأضداد يبدآن بين اليوم 90 واليوم 120 تقريباً، مع ارتفاع نسبة العجول المصابة ذات الأضداد القابلة للكشف وتراجع سريع في نسبة التي يمكن كشف الفيروس فيها، وأن إصابة الجنين بعد اليوم 180 تنتهي عادةً بولادة عجل طبيعي إيجابي مصلياً. يذكر دليل WOAH أن القيم العالية لمقايسة ELISA في الحليب المجمّع من قطيع غير ملقح تدل على احتمال كبير لتعرض القطيع لفيروس الإسهال الفيروسي البقري في الماضي القريب، على الأرجح بوجود حيوان أو أكثر مصاب بتفيرس دم مستديم، بينما تدل القيم المنخفضة جداً أو السلبية على أن وجود مثل هذه الحيوانات غير مرجح. يعدّد دليل WOAH اختلاف أساليب التربية والتلقيح الحديث ووجود مستضد فيروسي في الحليب المجمّع، وهو مستضد قد يتداخل مع مقايسة الأضداد، أسباباً لكون قيم مقايسة ELISA ليست دائماً مؤشراً موثوقاً على وجود حيوانات مصابة إصابة مستديمة بفيروس الإسهال الفيروسي البقري في المزارع.

مكانه في المعايير الدولية

يذكر دليل WOAH أن اختبارات التعادل الفيروسي تُستعمل أكثر في الأغراض التنظيمية مثل فحص الثيران المانحة للمني، في حين تشيع مقايسات ELISA لأضداد فيروس الإسهال الفيروسي البقري، وغالباً في صورة عُدد تجارية جاهزة، في التطبيقات التشخيصية. يعتمد فصل الإسهال الفيروسي البقري في دليل WOAH سلّماً رباعياً لملاءمة كل طريقة تشخيصية لكل غرض، تعني فيه ثلاث علامات زائد أن الطريقة موصى بها، وعلامتان أنها موصى بها مع قيود، وعلامة واحدة أنها مناسبة في ظروف محدودة جداً، وعلامة الناقص أنها غير مناسبة.