مقايسة الممتز المناعي المرتبط بالإنزيم (ELISA) لكشف المستضد (antigen detection by ELISA) اختبار يبحث عن مستضدات فيروس الإسهال الفيروسي البقري نفسه، ويذكر فصل الإسهال الفيروسي البقري في دليل المنظمة العالمية لصحة الحيوان (WOAH) أنها صارت طريقة معتمدة على نطاق واسع لكشف الحيوانات المصابة إصابة مستديمة فرداً فرداً. يذكر دليل WOAH، في حديثه عن كشف المستضد بمقايسة ELISA، أن الاختبار يقيس مستضد فيروس الإسهال الفيروسي البقري (NS2-3 أو ERNS) في محلَّلات الكريات البيض من الدم المحيطي.
ما الذي يكشفه الاختبار
يصنّف دليل WOAH فيروس الإسهال الفيروسي البقري ضمن جنس Pestivirus من فصيلة Flaviviridae، ويصفه بأنه فيروس ذو سلسلة مفردة خطية موجبة الاتجاه من الحمض النووي الريبي. تمثل الحيوانات المصابة إصابة مستديمة بفيروس الإسهال الفيروسي البقري، بحسب دليل WOAH، المستودع الرئيسي للفيروس في مجموعتها وتطرح كميات كبيرة منه في البول والروث والإفرازات والحليب والمني، ويذكر الدليل أن الحيوان الذي ينجو من عدوى فيروس الإسهال الفيروسي البقري داخل الرحم في الثلث الأول من الحمل يصبح مصاباً إصابة مستديمة في كل الحالات تقريباً. يشترط دليل WOAH أن يستهدف كشف الأبقار المصابة إصابة مستديمة بفيروس الإسهال الفيروسي البقري الفيروسَ ذاته أو مكوّناته تحديداً، أي حمضه النووي الريبي أو مستضداته، ويصف التعرف على هذه الأبقار بأنه ركن أساسي في مكافحة العدوى. يذكر دليل WOAH أن سلالات Pestivirus brazilense ترتبط هي الأخرى بمرض سريري في الأبقار لكنها تبدو محصورة أساساً في قطعان أمريكا الجنوبية وآسيا، وأن بعض مقايسات ELISA التجارية للمستضد ثبتت قدرتها على كشف هذه السلالات.
العينة
يذكر دليل WOAH أن الجيل الجديد من مقايسات ELISA لالتقاط مستضد ERNS لفيروس الإسهال الفيروسي البقري قادر على كشف المستضد في الدم وفي البلازما أو المصل أيضاً. أفاد تشخيص العدوى المستديمة بفيروس الإسهال الفيروسي البقري في الحيوان الحي، بحسب دليل WOAH، من خزعات الجلد كقطع الأذن، ويضيف الدليل أن عينات الجلد أُخذت من الحيوانات الحية، أما الحيوانات النافقة فتصلح منها أنسجة متنوعة كثيرة.
مبدأ الاختبار
يذكر دليل WOAH، في قسم كشف المستضد بمقايسة ELISA، أن معظم هذه المقايسات لفيروس الإسهال الفيروسي البقري تقوم على مبدأ الشطيرة، حيث يُثبَّت ضد لاقط على الطور الصلب ويُقرن ضد كاشف بنظام إشارة مثل البيروكسيداز. يصف دليل WOAH أنظمة لمقايسات ELISA لمستضد فيروس الإسهال الفيروسي البقري تعتمد على أضداد وحيدة النسيلة وأخرى على أضداد متعددة النسائل، ويذكر أن خطوات تضخيم مثل استعمال البيوتين والستربتافيدين في نظام الكشف تُضاف أحياناً لزيادة حساسية المقايسة.
الاستعمالات
يذكر دليل WOAH أن التعرف على الحيوانات المصابة إصابة مستديمة بفيروس الإسهال الفيروسي البقري اعتمد في الماضي كثيراً على عزل الفيروس في المزارع الخلوية، أما اليوم فتُستعمل على نطاق واسع مقايسات ELISA للمستضد وتفاعل البوليميراز المتسلسل في الوقت الحقيقي، ولكل منهما حساسية مرتفعة نسبياً، لكشف المستضدات أو الحمض النووي الريبي الفيروسي في الحيوانات الحية والنافقة. يذكر دليل WOAH أن عينات الحليب المجمّع في الخزان أو الحليب الفردي استُعملت لرصد وجود حيوان مصاب إصابة مستديمة بفيروس الإسهال الفيروسي البقري في قطعان الألبان، وأن مقايسة ELISA للمستضد وتفاعل البوليميراز المتسلسل في الوقت الحقيقي وعزل الفيروس استُعملت جميعها لهذا الغرض. ينص دليل WOAH على أنه لتأكيد تشخيص العدوى المستديمة بفيروس الإسهال الفيروسي البقري ينبغي إعادة فحص الحيوانات بعد فاصل لا يقل عن 3 أسابيع، بفحص عينات الدم بحثاً عن وجود الفيروس وعن غياب التحول المصلي. يذكر دليل WOAH أن مقايسات ELISA لمستضد فيروس الإسهال الفيروسي البقري، المعتمدة لكشف الحيوانات المصابة إصابة مستديمة، ليست مخصصة لكشف الحيوانات المصابة إصابة حادة، وإن أمكن ذلك أحياناً. يربط دليل WOAH قلة فائدة مقايسة ELISA للمستضد في كشف فيروس الإسهال الفيروسي البقري في العدوى الحادة بعابرية تفيرس الدم. يؤكد دليل WOAH أن مقايسات ELISA لمستضد فيروس الإسهال الفيروسي البقري غير مصممة لفحص المني أو المواد الحيوية المستعملة في المقايسات أو في تصنيع اللقاحات.
تفسير النتيجة
في الحالات النادرة التي تقترن فيها العدوى المستديمة بفيروس الإسهال الفيروسي البقري بإيجابية مصلية، يذكر دليل WOAH أن أفضل طرق كشف المستضد بمقايسة ELISA قد تكون المفضلة، وأن حساسيتها تقارب حساسية عزل الفيروس. يورد جدول ملحق بفصل الإسهال الفيروسي البقري في دليل WOAH أن الدراسات أبلغت لمقايسة ELISA للمستضد، على عينات المصل والدم الكامل وخزعات الجلد مثل قطع الأذن، حساسية تشخيصية بين 67 و100% ونوعية تشخيصية بين 98.8 و100% مقارنةً بعزل الفيروس، مع أن الحساسية والنوعية تكونان في العادة عاليتين جداً. الأضداد الأمية لفيروس الإسهال الفيروسي البقري لدى العجول الصغيرة التي تناولت اللبأ قد تقلل فعالية مقايسات ELISA لكشف المستضد، بحسب دليل WOAH، والأمر أوضح عند فحص الدم أو كرياته البيض. ينص دليل WOAH على أنه لا ينبغي فحص الدم أو كرياته البيض بمقايسة ELISA لالتقاط مستضد ERNS في الشهر الأول من العمر، ولا بمقايسة ELISA لمستضد NS2-3 في الأشهر الثلاثة الأولى، بسبب الأثر المثبّط للأضداد الأمية على كشف فيروس الإسهال الفيروسي البقري. يذكر دليل WOAH أن لفحص الحيوانات التي تناولت لبأً يحتوي أضداداً لفيروس الإسهال الفيروسي البقري، بمقايسات ELISA للمستضد أو بالقياس الخلوي التدفقي على الدم أو كرياته البيض، قيوداً تحدد متى يكون هذا الفحص موثوقاً. يرى دليل WOAH أن تفاعل البوليميراز المتسلسل في الوقت الحقيقي هو على الأرجح أكثر طرق كشف فيروس الإسهال الفيروسي البقري حساسية في حالة العجول ذات الأضداد الأمية، ويستشهد بدراسة Cornish وزملائه عام 2005 التي أظهرت أن مقايسة ELISA لمستضد ERNS اختبار حساس وموثوق أيضاً عند استعمالها على خزعات الجلد من قطع الأذن. يدعو دليل WOAH إلى الحذر عند إعادة فحص عينات الجلد، إذ ثبت أن مستضد فيروس الإسهال الفيروسي البقري قد يبقى في الجلد أسابيع كثيرة في بعض الحالات الحادة. يذكر دليل WOAH أن مقايسات ELISA للمستضد ذات الحساسية التحليلية العالية المثبتة، أو تفاعل البوليميراز المتسلسل في الوقت الحقيقي، يمكن أن تتجاوز بعض القيود في كشف فيروس الإسهال الفيروسي البقري.
مكانه في المعايير الدولية
يوجب دليل WOAH أن تخضع كل طريقة لفحص فيروس الإسهال الفيروسي البقري لتحقق واسع من صلاحيتها، تُختبر فيه على تجمعات أبقار معروفة الحالة، سليمة ومصابة، منها حيوانات يكون عيار الفيروس في دمها منخفضاً وأخرى يكون فيها عالياً. يطلب دليل WOAH من مقايسات ELISA وسائر الطرق القائمة على ارتباط الأضداد، ومن طرق الوسم المناعي وطرق التعرف على الحمض النووي، برهاناً على أنها تكشف فيروسات الإسهال الفيروسي البقري في كامل مداها من التنوع المستضدي والجيني. يدرّج جدول طرق التشخيص في فصل الإسهال الفيروسي البقري من دليل WOAH ملاءمة الطرق لكل غرض من «موصى بها لهذا الغرض» إلى «موصى بها لكن لها قيود» ثم «مناسبة في ظروف محدودة جداً» وأخيراً «غير مناسبة لهذا الغرض».