عزل فيروس الإسهال الفيروسي البقري (virus isolation) طريقة تُلقَّح فيها العينة على مزارع خلوية قابلة للعدوى ثم يُكشف تكاثر الفيروس فيها بطرق الوسم المناعي، كما يصفها فصل الإسهال الفيروسي البقري في دليل المنظمة العالمية لصحة الحيوان (WOAH). يعدّد ملحق آراء الخبراء في دليل WOAH من مزايا عزل فيروس الإسهال الفيروسي البقري نوعيته العالية، وتحديده وجود الفيروس المُعدي، وكونه الطريقة المفضلة لتحديد وجود السلالات الممرضة للخلايا ومن ثم تأكيد المرض المخاطي.
ما الذي يكشفه الاختبار
يصنّف دليل WOAH فيروس الإسهال الفيروسي البقري في جنس Pestivirus من فصيلة Flaviviridae، ويصفه بأنه فيروس جينومه سلسلة خطية مفردة موجبة الاتجاه من الحمض النووي الريبي. يصف دليل WOAH الإصابة المستديمة بفيروس الإسهال الفيروسي البقري بأنها النتيجة شبه الثابتة لدى الحيوانات التي تبقى حية بعد عدوى داخل الرحم خلال الأشهر الثلاثة الأولى من الحمل. يذكر دليل WOAH أن لنوعي فيروس الإسهال الفيروسي البقري Pestivirus bovis وPestivirus tauri نمطين حيويين ممرضاً للخلايا وغير ممرض لها، وأن السلالات غير الممرضة للخلايا هي الشائعة في العدوى الحقلية ومحور العزل التشخيصي في المزارع الخلوية. يذكر دليل WOAH أن فيروسات الإسهال الفيروسي البقري الممرضة للخلايا تُصادَف في حالات المرض المخاطي، ويصف هذا المرض بأنه متلازمة سريرية غير شائعة نسبياً تنطوي على «عدوى فوقية» تصيب حيواناً مصاباً إصابة مستديمة بفيروس غير ممرض للخلايا بسلالة ممرضة للخلايا وثيقة القرابة به.
العينة
يعدّ دليل WOAH خلايا الطبقة البيضاء والدم الكامل والكريات البيض المغسولة والمصل عينات مناسبة لعزل فيروس الإسهال الفيروسي البقري من الحيوانات الحية. يذكر دليل WOAH أن النمط الحيوي الممرض للخلايا من فيروس الإسهال الفيروسي البقري قد يُعزل أحياناً من الدم، لكنه يُستعاد على نحو أكثر ثباتاً من أنسجة أخرى، ولا سيما الطحال والأمعاء ولطخات باير. يصف دليل WOAH الطحال بأنه عينة يسهل جمعها ونادراً ما تكون سامة للمزارع الخلوية، ويُنجَز منها عزل فيروس الإسهال الفيروسي البقري بسهولة. يحذّر دليل WOAH من أن عزل فيروس الإسهال الفيروسي البقري من الدم قد يتشوش بوجود الأضداد الأمية لدى العجول دون 4-5 أشهر من العمر، فيما يُعرف بالفجوة التشخيصية.
مبدأ الاختبار
يذكر دليل WOAH أن فيروس الإسهال الفيروسي البقري يمكن عزله في عدد من مزارع الخلايا البقرية وحيدة الطبقة، كخلايا الكلية أو الرئة أو الخصية أو القرينات الأنفية. يذكر دليل WOAH أن طرق العزل التقليدية تُستعمل لفيروس الإسهال الفيروسي البقري مع إضافة خطوة تلوين مناعي نهائية، بالتألق المناعي أو بتلوين البيروكسيداز وهو الأكثر استعمالاً، لكشف نمو الفيروس غير الممرض للخلايا. يورد دليل WOAH طريقة الأنابيب لمعلّقات الأنسجة أو الطبقة البيضاء ضمن طرق عزل فيروس الإسهال الفيروسي البقري. يذكر دليل WOAH أن عزل فيروس الإسهال الفيروسي البقري يفرض متطلبات صارمة جداً، غايتها نظام شديد الحساسية من المزارع الخلوية ومكوّنات الوسط لا يتأثر بوجود مستويات منخفضة من الفيروس أو من أضداده النوعية. يشترط دليل WOAH أن يكون مصل الأجنة البقري المستعمل في زراعة الخلايا خالياً من فيروس الإسهال الفيروسي البقري، وأن يكون خالياً كذلك من الأضداد المعادلة له، وهو أمر يراه بالأهمية نفسها أو ربما أهم. يذكر دليل WOAH أن معظم دفعات مصل الأجنة البقري المجموعة تجارياً تحتوي أضداداً لفيروسات جنس Pestivirus، أحياناً بمستويات بالكاد تُكشف لكنها كافية لتثبيط عزل فيروس الإسهال الفيروسي البقري، وأن معظم هذه الدفعات تكون إيجابية بتفاعل البوليميراز المتسلسل في الوقت الحقيقي حتى بعد تعطيل الفيروس بالتشعيع. يصف دليل WOAH فيروس الإسهال الفيروسي البقري غير الممرض للخلايا بأنه ملوِّث شائع للأنسجة البقرية، ويشترط فحص المزارع الخلوية بانتظام للتأكد من خلوها من الفيروس الدخيل. يذكر ملحق آراء الخبراء في دليل WOAH أن عزل فيروس الإسهال الفيروسي البقري يتطلب قدرات متخصصة في الزراعة الخلوية وإمكان الحصول على مواد خالية من الفيروس.
الاستعمالات
يذكر دليل WOAH أن التعرف على الحيوانات المصابة إصابة مستديمة بفيروس الإسهال الفيروسي البقري اعتمد في الماضي كثيراً على العزل في المزارع الخلوية، وأن العزل الموجه إلى كشف الفيروس غير الممرض للخلايا في الدم لا يزال مستعملاً. يذكر دليل WOAH، في سياق بعينه تكون فيه مستويات فيروس الإسهال الفيروسي البقري منخفضة جداً، أن عزل الفيروس لا يكون عملياً في العادة ما لم تكن هناك حاجة إلى توصيف السلالة المعنية. يذكر دليل WOAH أن التأكيد المخبري لتشخيص المرض المخاطي يستلزم عزل فيروس الإسهال الفيروسي البقري الممرض للخلايا، مع أن هذا العزل لا يُجرى لأغراض التشخيص الروتيني. يذكر ملحق آراء الخبراء في دليل WOAH أن عزل فيروس الإسهال الفيروسي البقري يوفر عزلات فيروسية للتوصيف المفصل.
تفسير النتيجة
يصف دليل WOAH عزل فيروس الإسهال الفيروسي البقري بأنه موثوق جداً عندما يُجرى بمستوى عالٍ. يذكر دليل WOAH أن عزل فيروس الإسهال الفيروسي البقري، شأنه شأن الكيمياء النسيجية المناعية، كثيف العمل ومكلف وقد يكون متطلباً تقنياً. أسابيعُ العزل في مقابل ساعاتٍ قليلة: بهذه المقارنة يبرز دليل WOAH إحدى مزايا تفاعل البوليميراز المتسلسل في الوقت الحقيقي على عزل فيروس الإسهال الفيروسي البقري، إلى جانب حساسيته الأعلى، ويذكر أن هذا التفاعل يتغلب إلى حد كبير على مشكلات تعترض العزل.
مكانه في المعايير الدولية
يقدّر جدول طرق التشخيص في فصل الإسهال الفيروسي البقري من دليل WOAH ملاءمة كل طريقة لكل غرض على سلّم من أربع درجات، أعلاها «موصى بها لهذا الغرض» ثم «موصى بها لكن لها قيود» ثم «مناسبة في ظروف محدودة جداً» وأدناها «غير مناسبة لهذا الغرض».