عزل فيروس الإسهال الفيروسي البقري من المني (virus isolation from semen) طريقة زرع خلوي يفرد لها فصل الإسهال الفيروسي البقري في دليل المنظمة العالمية لصحة الحيوان (WOAH) قسماً خاصاً، وتُفحص بها عادةً عينات المني البقري الممدَّد وأحياناً المني الخام. يعدّ دليل WOAH فحص المني من جميع الثيران الإيجابية مصلياً لفيروس الإسهال الفيروسي البقري أمراً أساسياً لاستبعاد احتمال العدوى الخصوية المستديمة، مع أن هذه العدوى لا تزال تُعدّ غير شائعة.
ما الذي يكشفه الاختبار
فيروس الإسهال الفيروسي البقري، كما يصنّفه دليل WOAH، عضو في جنس Pestivirus من فصيلة Flaviviridae، وجينومه سلسلة واحدة خطية موجبة الاتجاه من الحمض النووي الريبي. يذكر دليل WOAH أن الحيوانات التي تنجو من عدوى فيروس الإسهال الفيروسي البقري داخل الرحم في الثلث الأول من الحمل تكاد تكون دائماً مصابة إصابة مستديمة، وأن الثيران المصابة إصابة مستديمة يكون منيّها عادةً رديء الجودة وشديد العدوى وخصوبتها منخفضة. يذكر دليل WOAH أن الثيران قد تطرح فيروس الإسهال الفيروسي البقري في المني لمدة قصيرة أثناء العدوى وبعدها مباشرة، وقد تعاني انخفاضاً مؤقتاً في الخصوبة. يذكر دليل WOAH أن مستوى فيروس الإسهال الفيروسي البقري في مني الثيران المصابة حديثاً منخفض عموماً، لكنه قد يخفض معدلات الحمل ويكون مصدراً محتملاً لإدخال الفيروس إلى قطيع لم يتعرض له من قبل. يذكر دليل WOAH أن عدوى خصوية مستديمة بفيروس الإسهال الفيروسي البقري اكتُشفت لدى بعض الثيران التي تعافت من عدوى حادة ولم تعد مصابة بتفيرس الدم وأصبحت إيجابية مصلياً. يصف دليل WOAH العدوى المستديمة للخصيتين بفيروس الإسهال الفيروسي البقري بأنها حدث نادر قد ينجم عن عدوى حادة في سن البلوغ، ينتج عنه ثيران شديدة الإيجابية مصلياً تطرح الفيروس في المني على نحو متقطع، ويذكر أن هذه الظاهرة لوحظت أيضاً بعد التلقيح بفيروس موهَّن.
العينة
ينص دليل WOAH على أنه ينبغي نقل عينات المني المرسلة لعزل فيروس الإسهال الفيروسي البقري إلى المختبر في النيتروجين السائل أو على الثلج الجاف. يطلب دليل WOAH من المختبر المستقبِل لعينات فحص فيروس الإسهال الفيروسي البقري أن يوثّق حالة العينات عند وصولها، ويشدد على العناية بالتقيد بتوصيات نقل العينات. يذكر دليل WOAH، في قسم عزل فيروس الإسهال الفيروسي البقري من المني، أن المني الخام سام للخلايا، وأن السمية قد تُصادَف أيضاً مع المني الممدَّد. يذكر دليل WOAH أن كشف المستويات المنخفضة من فيروس الإسهال الفيروسي البقري الموجودة في بعض العينات، ولا سيما المني، قد يتطلب فحص كميات من العينة أكبر من المعتاد. ينبّه دليل WOAH إلى أن عزل فيروس الإسهال الفيروسي البقري لا يستطيع إلا كشف الفيروس المُعدي، وهو ما يفرض حدوداً معينة على جودة العينة.
الاستعمالات
يذكر دليل WOAH أن تأكيد أن الثور غير مصاب إصابة مستديمة بفيروس الإسهال الفيروسي البقري يتحقق بأيسر صورة بفحص عينة دم. ينص دليل WOAH على أنه ينبغي فحص جميع الثيران المستعملة في التلقيح الطبيعي أو الاصطناعي بحثاً عن العدوى الحادة والمستديمة بفيروس الإسهال الفيروسي البقري. يذكر دليل WOAH أنه ينبغي أخذ عينات من الثيران المانحة للمني لفحص خلوها من عدوى فيروس الإسهال الفيروسي البقري قبل جمع المني، وفقاً للمدونة الصحية لحيوانات اليابسة. يرى دليل WOAH أن فحص مني الثور الإيجابي مصلياً لفيروس الإسهال الفيروسي البقري لا يستدعي مزيداً من التكرار بعد فحص سلسلة من الجمعات.
تفسير النتيجة
يذكر دليل WOAH أن فيروس الإسهال الفيروسي البقري قد يُكشف في معظم جمعات المني من الثيران ذات العدوى الخصوية المستديمة لا في جميعها. يذكر دليل WOAH أن عدوى فيروس الإسهال الفيروسي البقري لا يُتوقع أن تُحدث تأثيراً ممرضاً للخلايا في مزارع عزل المني، لكن فيروسات أخرى قد تُعزل منها عن غير قصد. يعدّ دليل WOAH عينة المني سلبية لفيروس الإسهال الفيروسي البقري إذا لم يُكشف فيها دليل على مستضد فيروسي أو حمض نووي ريبي للفيروس. يعرض دليل WOAH تفاعل البوليميراز المتسلسل في الوقت الحقيقي طريقةً تتجاوز إلى حد كبير مشكلات عزل فيروس الإسهال الفيروسي البقري، ومن مزاياه على العزل حساسية أعلى وإمكان إنجازه في ساعات بدل الأسابيع التي يحتاجها العزل. في فحص المني لإثبات الخلو من فيروس الإسهال الفيروسي البقري، يذكر دليل WOAH أن تفاعل البوليميراز المتسلسل في الوقت الحقيقي أثبت فائدة كبيرة جداً، وأن نتائجه كثيراً ما تفوق نتائج عزل الفيروس في المزرعة الخلوية، ولا سيما حين تنخفض مستويات الفيروس كما قد يحدث لدى الثيران ذات العدوى الخصوية المستديمة.
مكانه في المعايير الدولية
يرتّب جدول طرق التشخيص في فصل الإسهال الفيروسي البقري من دليل WOAH ملاءمة كل طريقة لكل غرض في أربع فئات: موصى بها، وموصى بها مع قيود، ومناسبة في ظروف محدودة جداً، وغير مناسبة لذلك الغرض.