اختبار تثبيت المتممة (CFT) للكلاميديا الببغائية (Chlamydia psittaci complement fixation test) طريقة مصلية تُستعمل لدى الطيور للبحث عن أضداد الكلاميديا في المصل. تعدّ المنظمة العالمية لصحة الحيوان (WOAH) هذا الاختبار واحداً من ثلاث طرائق مصلية رئيسية لكشف أضداد الكلاميديا، والطريقتان الأخريان هما أنواع من اختبار التراص بالأجسام الأولية (EBA) ومقايسة الممتز المناعي المرتبط بالإنزيم (ELISA).
ما الذي يكشفه الاختبار
تعرّف WOAH داء الكلاميديا الطيرية بأنه مرض ناجم عن عدوى الطيور بنوع من جنس الكلاميديا. تذكر WOAH أن Chlamydia psittaci ظلت حتى وقت قريب تُعدّ السبب الوحيد للمرض في الطيور، وأن العدوى بها شائعة في أنحاء العالم وقد وُجدت في نحو 465 نوعاً من الطيور. يبيّن دليل WOAH أن اختبار التثبيت المباشر يلتقط الغلوبولين المناعي IgG الطيري دون IgM، ولذلك قد تفوته الإصابات الحديثة.
العينة
عينة هذا الاختبار هي المصل، ويُسخَّن المصل المراد فحصه قبل الاستعمال على درجة 60 مئوية لمدة 30 دقيقة لتعطيل المتممة الموجودة فيه. تشترط WOAH في دليلها التحقق من خلوّ كل مصل من النشاط المضاد للمتممة، واستبعاد الأمصال التي تُظهر هذا النشاط من التحليل.
مبدأ الاختبار
تعتمد WOAH في داء الكلاميديا الطيرية طريقة تثبيت متممة مباشرة معدّلة. يختلف التعديل عن الطريقة المباشرة في إضافة مصل دجاج عادي غير مسخَّن، مأخوذ من دجاج خالٍ من أضداد الكلاميديا، إلى تخفيف المتممة. ينص دليل WOAH على تحضير تخفيفات مضاعفة من المصل المخفَّف في صفائح دقيقة ذات 96 بئراً قاعها مستدير. يوضح دليل WOAH أن متممة خنزير غينيا تُخفَّف قبل إضافة المستضد، وأن المستعمل منها وحدتان حالّتان للدم. يُضاف بعد ذلك معلّق من كريات الدم الحمراء المغسولة والمحسَّسة بتركيز 2–4 %، ثم تُحضَّن الصفائح 30 دقيقة على 37 مئوية وتُنبَذ مركزياً 5 دقائق.
تفسير النتيجة
تبقى الأضداد المضادة للكلاميديا في الطيور مدة قد تبلغ عدة أشهر، وهذا مع ارتفاع انتشار العدوى يحدّ من فائدة المصلية وحدها في تشخيص عدوى جارية بحسب WOAH. لدى معظم أنواع الطيور معدل خلفية مرتفع من الأضداد المضادة للكلاميديا، والنتيجة الموجبة دليل على أن الطائر أُصيب بالجرثوم لكنها لا تدل بالضرورة على عدوى فعّالة. قد تظهر نتائج سالبة كاذبة في الطيور المصابة إصابة حادة إذا أُخذت العينة قبل التحوّل المصلي، وقد يؤخّر العلاج بالمضادات الحيوية استجابة الأضداد أو يضعفها. لتحديد ما إذا كان طائر مفرد مصاباً توصي WOAH بأن تقترن المصلية بكشف المستضد أو المورّثات، أو بفحص أمصال مزدوجة، غير أن الفحص الإلزامي للأمصال المزدوجة يُبعد المصلية عن الفائدة السريرية الفورية. يخالف اختبار التراص بالأجسام الأولية اختبار التثبيت في أنه يكشف أساساً الغلوبولين المناعي IgM، فيستطيع كشف العدوى المبكرة، أما الصيغة المعدّلة من اختبار التثبيت فأكثر حساسية من الأصلية لكنها تحمل العيوب نفسها.
مكانه في المعايير الدولية
تذكر WOAH أن اختبار تثبيت المتممة يُستبدل بصورة متزايدة بمقايسات ELISA عالية الحساسية والنوعية تقوم على بروتينات مأشوبة أو مستضدات ببتيدية.
السلامة المخبرية
تنبّه WOAH إلى أن سلالات الكلاميديا الطيرية قد تصيب الإنسان، وأنه ينبغي التعامل معها وفق إجراءات مناسبة للسلامة الحيوية والاحتواء. يذكر دليل WOAH أن معظم حالات العدوى البشرية بالكلاميديا الطيرية تحدث باستنشاق الهباء المعدي.