طُوّرت طريقتان متعددتا العوامل الممرضة تشملان كشف Ehrlichia ruminantium، العامل المسبب لمرض الماء القلبي (heartwater)، وتتيحان إجراء التشخيص التفريقي للأمراض المنقولة بالقراد. تصف المنظمة العالمية لصحة الحيوان تفاعلين من تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) في الوقت الحقيقي: تفاعل FRET يفرّق ثمانية أنواع إيرليخية، منها E. ruminantium، في تفاعل واحد (Zhang et al., 2015)، وتفاعل Taqman ثنائي الهدف (dual-plex) يستهدف جين groEL لدى Panola Mountain Ehrlichia وE. ruminantium (Sayler et al., 2016).
تفاعل FRET في الوقت الحقيقي
يعتمد تفاعل FRET في الوقت الحقيقي على تضخيم الرنا 16S بمسبارين متألقين، وتُرصد فيه منحنيات تفكك تختلف باختلاف النوع، وتتميز E. ruminantium بينها بوضوح بأدنى درجة حرارة انصهار. لم تُختبر على تفاعل FRET في الوقت الحقيقي سوى أربع سلالات من E. ruminantium، رغم أن حد كشفه يبلغ خمس نسخ لكل عينة وأنه يكشف الأنواع معاً في مزيج يضم 300 نسخة من كل نوع. ترى المنظمة العالمية لصحة الحيوان أن التحقق من تفاعل FRET في الوقت الحقيقي على عدد أكبر من سلالات E. ruminantium ضروري، حتى وإن كان استهدافه جين 16S المحفوظ يحدّ من فشل التضخيم.
تفاعل Taqman ثنائي الهدف
يميّز تفاعل Taqman ثنائي الهدف بين Panola Mountain Ehrlichia، المتوطنة في الولايات المتحدة الأمريكية، وE. ruminantium غير الموجودة فيها حالياً. يبلغ حد الكشف في تفاعل Taqman ثنائي الهدف 10 نسخ لكل عينة، وقد كشف 27 سلالة من E. ruminantium من 11 بلداً، وتصفه المنظمة العالمية لصحة الحيوان بأنه يبدو طريقة واعدة للتشخيص التفريقي بين النوعين.