طُوّر تفاعلان متداخلان من تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) لتحسين كشف المستويات المنخفضة من الريكتسيات في الدم (rickettsemia) في عدوى Ehrlichia ruminantium المسببة لمرض الماء القلبي (heartwater). يستخدم المختبر المرجعي التابع للمنظمة العالمية لصحة الحيوان تفاعل pCS20 المتداخل روتينياً لأغراض التشخيص على عينات الدم من الحالات السريرية ولمسح القراد.
مقارنة بالاختبارات الأخرى
يبلغ متوسط حد الكشف في تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) المتداخل 6 كائنات لكل تفاعل، وتتحسن حساسيته مئة ضعف مقارنة بتفاعل PCR البسيط AB128/AB129. تفيد المنظمة العالمية لصحة الحيوان بأن تفاعلي PCR المتداخل وفي الوقت الحقيقي أسهل أداءً وأكثر حساسية من تقنية اللطخة الخطية العكسية (RLB). يؤدي تفاعل map1 المتداخل أداءً جيداً لكن بحساسية أقل قليلاً من تفاعل pCS20 المتداخل، عند 60 نسخة لكل عينة. لا تعدّ المنظمة العالمية لصحة الحيوان تفاعل map1 المتداخل أداة تشخيص بسبب الطبيعة متعددة الأشكال للجينات المستهدفة في map1، وإن كانت تراه مفيداً للتوصيف الجيني لبكتيريا E. ruminantium.
العينة
يصلح القراد للفحص بتفاعلات pCS20 المتداخلة طازجاً أو مجمداً أو محفوظاً في إيثانول 70%، وتشمل العينات الأخرى دم الحيوانات المصابة خلال ارتفاع الحرارة وأعضاء النافقة منها كالرئة والدماغ.
تفسير النتيجة وحدوده
يمكن كشف E. ruminantium بتفاعل PCR المتداخل في دم الحيوانات قبل ارتفاع الحرارة بيوم أو يومين وخلال فترة ارتفاعها، لكن ليس لدى الحيوانات عديمة الأعراض. تعدد أشكال النوكليوتيد المفرد (SNPs) في مناطق ارتباط البادئات من جزء pCS20 سبب لوحظ لغياب التضخيم في تفاعل pCS20 المتداخل التقليدي، بحسب المنظمة العالمية لصحة الحيوان.