اختبار الانتشار المناعي في هلام الآجار (Equine infectious anaemia virus agar gel immunodiffusion)، المعروف باسم اختبار كوجنز نسبة إلى مطوّره الدكتور ليروي كوجنز، اختبار مصلي يصفه دليل المنظمة العالمية لصحة الحيوان (WOAH)، إلى جانب مقايسات الممتز المناعي المرتبط بالإنزيم (ELISA)، بأنه بسيط وموثوق لإثبات العدوى بفيروس فقر الدم المعدي الخيلي. يكشف اختبار الانتشار المناعي في هلام الآجار (AGID)، بحسب دليل WOAH، الأجسام المضادة المرسِّبة التي تتكوّن استجابةً للعدوى بفيروس فقر الدم المعدي الخيلي، وهي عدوى فيروسية مستديمة تصيب الخيليات.
ما الذي يكشفه الاختبار
يذكر دليل WOAH أن بقاء فيروس فقر الدم المعدي الخيلي في الخيليات المصابة يجعل كشف الأجسام المضادة له في المصل تأكيداً لتشخيص العدوى، وأن الخيول المصابة تظل حاملة للفيروس في دمها مدى الحياة وتعطي نتيجة مصلية إيجابية إلا في استثناءات نادرة جداً. يصف دليل WOAH البروتين p26 بأنه بروتين بنيوي داخلي في فيروس فقر الدم المعدي الخيلي يرمّزه الجين gag، ويذكر أنه أكثر ثباتاً من الناحية المستضدية بين سلالات الفيروس من البروتينين السكريين gp45 وgp90 في غلاف الفيروس.
مبدأ الاختبار
يشرح استعراض Sellon المنشور عام 1993 أن خطاً معتماً من الراسب يظهر في اختبار كوجنز حين يبلغ المستضد الذائب والأجسام المضادة لفيروس فقر الدم المعدي الخيلي منطقةً تكون نسبتهما فيها مثلى. يوضح دليل WOAH أن التفاعل النوعي في اختبار الانتشار المناعي يظهر على هيئة خطوط ترسيب بين مستضد فقر الدم المعدي الخيلي ومصل الحيوان المفحوص، وأنه يتأكد بتطابق هذه الخطوط مع خط التفاعل بين المستضد والمصل القياسي الإيجابي.
الاستعمالات
يذكر Issel وزملاؤه في مقالة نشرتها مجلة Veterinary Record عام 2013 أن التشخيص المصلي للعدوى بفيروس فقر الدم المعدي الخيلي اعتمد أساساً على اختبار الانتشار المناعي في هلام الآجار. يعدّ Issel وزملاؤه اختبار الانتشار المناعي في هلام الآجار الاختبار المصلي المعياري الذهبي لفقر الدم المعدي الخيلي، لثبوت توافقه مع نتائج اختبارات حقن الخيول بالفيروس ولندرة تفاعلاته الإيجابية الكاذبة الشديدة. يصف المختبر البيطري للتشخيص الطبي في جامعة تكساس A&M اختبار كوجنز بأنه المعيار الذهبي لتشخيص فقر الدم المعدي الخيلي، ويذكر أنه يكشف الأجسام المضادة النوعية للفيروس بنوعية عالية. يذكر دليل MSD البيطري أن اختبار الانتشار المناعي في هلام الآجار (كوجنز) هو الاختبار المصلي المقبول دولياً لفقر الدم المعدي الخيلي، مع أن أنواعاً من مقايسات ELISA التنافسية أو القائمة على مستضدات مصنّعة تلقى قبولاً متزايداً لأنها تعطي نتائج سريعة. يذكر دليل WOAH أن فقر الدم المعدي الخيلي قد يُشتبه به من العلامات السريرية والآفات المرضية، لكن تأكيد العدوى يتطلب اختبارات مصلية وجزيئية إضافية. يرى دليل WOAH أنه ينبغي تأكيد النتيجة الإيجابية لمقايسة ELISA في فقر الدم المعدي الخيلي باختبار AGID، لأن نتائج إيجابية كاذبة لوحظت مع ELISA. تذكر دراسة Carvelli وزملائه المنشورة عام 2024 عن الترصد النشط لمجمل الخيليات في إيطاليا أن اختبار AGID استُعمل بين 2007 و2010 اختباراً للمسح واختباراً تأكيدياً في آن واحد، على النحو الذي وصفه دليل WOAH النافذ آنذاك.
تفسير النتيجة
يصف دليل WOAH اختبار AGID بأنه نوعي، وهي ميزة تتيح التمييز بين تفاعلات المستضد والجسم المضاد الخاصة بفقر الدم المعدي الخيلي وغيرها. يذكر دليل WOAH أن الأمصال الخالية من الأجسام المضادة لفقر الدم المعدي الخيلي لا تكوّن خطوط ترسيب ولا تؤثر في خطوط تفاعل الكواشف القياسية. ينبّه دليل WOAH إلى أن خطوط ترسيب غير نوعية قد تظهر في اختبار الانتشار المناعي لفقر الدم المعدي الخيلي، وأنها قد تقطع خطوط الشاهد دون أن تُظهر عادةً خط تطابق معها. يعدّ دليل WOAH اختبارات AGID ومقايسات ELISA دقيقة وموثوقة لكشف فقر الدم المعدي الخيلي في الخيول، باستثناء الحيوانات في المراحل المبكرة من العدوى والمهور المولودة لأمهات مصابة. يذكر مركز صحة الخيول في جامعة كاليفورنيا بديفيس أن اختبار AGID أو كوجنز قد لا يكشف الأجسام المضادة لفقر الدم المعدي الخيلي إلا بعد أسبوعين أو ثلاثة من إصابة الحصان. يذكر Issel وزملاؤه أن مقايسات ELISA أعلى حساسية بطبيعتها من اختبار الانتشار المناعي في هلام الآجار في كشف الأجسام المضادة، فتساعد على كشف خيليات مصابة بفيروس فقر الدم المعدي الخيلي يُبلَّغ عن مصلها سلبياً في اختبار الانتشار المناعي لانخفاض أجسامها المضادة للمستضد p26. يصف استعراض Sellon المنشور عام 1993 اختبار كوجنز، الذي طُوّر في مطلع السبعينيات، بأنه عالي الحساسية والنوعية، وبأنه كان حتى تاريخ الاستعراض أوسع الاختبارات المخبرية استعمالاً لتشخيص العدوى بفيروس فقر الدم المعدي الخيلي. يذكر استعراض Sellon لعام 1993 أن خيولاً قليلة أعطت في اختبار AGID نتائج سلبية أو ملتبسة باستمرار، ثم ثبتت إصابتها بفيروس فقر الدم المعدي الخيلي بحقن دمها في خيول سلبية مصلياً. وجدت دراسة Carvelli وزملائه أن الاعتماد على اختبار AGID وحده اختباراً تأكيدياً في السنوات الأربع الأولى من الترصد الإيطالي لفقر الدم المعدي الخيلي أدى إلى عدد متوقع لكنه غير هيّن من الحيوانات السلبية الكاذبة، فقُدّر الانتشار المصلي بأقل من حقيقته. يذكر مركز CFSPH بجامعة ولاية آيوا أن بعض الخيليات المصابة بفقر الدم المعدي الخيلي، ولا سيما البغال، وُجدت إيجابية في ELISA وسلبية أو ضعيفة التفاعل في AGID، وأن بعض البلدان باتت تؤكد حالة الحيوان باختبار اللطخة المناعية إذا اختلفت نتيجتا الاختبارين.
مكانه في المعايير الدولية
يصنّف الجدول 1 في فصل فقر الدم المعدي الخيلي من دليل WOAH اختبار AGID في درجة «موصى به مع وجود قيود» لإثبات خلو مجموعة من الحيوانات من العدوى، وخلو الحيوان الفرد قبل نقله، والإسهام في سياسات الاستئصال، وتأكيد الحالات السريرية، وترصد انتشار العدوى، ويعدّه غير مناسب لتقييم الحالة المناعية بعد التلقيح.