عزل فيروس فقر الدم المعدي الخيلي (Equine infectious anaemia virus Virus isolation) طريقة يصفها دليل المنظمة العالمية لصحة الحيوان (WOAH) لإظهار فيروس فقر الدم المعدي الخيلي بحقن دم الحصان المشتبه به في مزارع كريات بيض محضّرة من خيول خالية من العدوى، أو في حصان قابل للعدوى. يذكر دليل WOAH أن عزل فيروس فقر الدم المعدي الخيلي ليس ضرورياً في العادة لوضع التشخيص، وأنه نادراً ما يُحاوَل بسبب صعوبة استنبات مزارع كريات الدم البيض من الخيول وما يتطلبه من وقت وجهد وكلفة.
ما الذي يكشفه الاختبار
يعرّف دليل WOAH فقر الدم المعدي الخيلي بأنه عدوى فيروسية مستديمة في الخيليات، ويذكر أن العامل المسبب، فيروس فقر الدم المعدي الخيلي، فيروس بطيء من فصيلة Retroviridae وتحت فصيلة Orthoretrovirinae. يذكر دليل MSD البيطري أن فيروس فقر الدم المعدي الخيلي يوجد في الحيوانات المصابة حراً في البلازما أو مرتبطاً بالخلايا الوحيدة والبلاعم، وأن أحماله تبلغ ذروتها في نوبات الحمى ثم تنخفض مع السيطرة المناعية على تكاثره. يذكر مركز CFSPH بجامعة ولاية آيوا أن فيروس فقر الدم المعدي الخيلي قد يوجد في البلازما وفي كريات الدم البيض خلال نوبات الحمى، وأنه يكون عادةً مرتبطاً بالخلايا في الفترات الفاصلة بينها وقد يكون كامناً. يذكر المختبر البيطري للتشخيص الطبي في جامعة تكساس A&M أن فيروس فقر الدم المعدي الخيلي يندمج بعد عدوى الخيلي في بلاعم المضيف ويبقى فيه مدى الحياة لقدرته على الإفلات من التصفية المناعية.
العينة
يذكر مركز CFSPH بجامعة ولاية آيوا أن فيروس فقر الدم المعدي الخيلي يمكن عزله عند الحاجة في مزارع كريات الدم البيض للخيول، لكن هذه الخلايا صعبة الاستنبات، وعزل الفيروس غير متاح عادةً في مختبرات التشخيص العادية.
مبدأ الاختبار
يذكر دليل WOAH أن إنتاج فيروس فقر الدم المعدي الخيلي في المزارع يمكن تأكيده بكشف المستضد النوعي للمرض، أو بمقايسة التألق المناعي، أو بالاختبارات الجزيئية. يضيف ملخص فصل فقر الدم المعدي الخيلي في دليل WOAH إلى وسائل تأكيد نجاح العزل في مزارع كريات الدم البيض للخيول التقنياتِ القائمة على تفاعل البوليميراز المتسلسل وحقنَ سوائل المزرعة في خيول قابلة للعدوى، إلى جانب كشف المستضد النوعي والتألق المناعي. يذكر مركز CFSPH بجامعة ولاية آيوا أن هوية فيروس فقر الدم المعدي الخيلي المعزول يمكن تأكيدها بمقايسات ELISA النوعية للمستضد أو بالتألق المناعي أو بتفاعل البوليميراز المتسلسل بالنسخ العكسي. يذكر دليل WOAH أن فيروس فقر الدم المعدي الخيلي لا يُعدّ خطراً على صحة الإنسان، وأنه ينبغي إجراء التعامل المخبري معه عند مستوى سلامة حيوية واحتواء مناسب يحدده تحليل المخاطر الحيوية.
الاستعمالات
يذكر مركز CFSPH بجامعة ولاية آيوا أن العدوى بفيروس فقر الدم المعدي الخيلي تُؤكَّد عادةً بالاختبارات المصلية لأن الحيوانات المصابة تحمل الفيروس مدى الحياة، وأن مقايسات تفاعل البوليميراز المتسلسل بالنسخ العكسي قد تفيد أيضاً، في حين أن طرقاً أخرى كعزل الفيروس ممكنة لكنها نادرة الاستعمال. يذكر مركز CFSPH بجامعة ولاية آيوا أن دم الخيلي الذي تعذّر تحديد حالته من فقر الدم المعدي الخيلي بطرق أخرى قد يُحقن في حصان قابل للعدوى، تُراقب حالته من الأجسام المضادة وعلاماته السريرية مدة لا تقل عن 45 يوماً. يصف استعراض Sellon المنشور عام 1993 حالات قليلة لخيول ظلت نتائجها المصلية سلبية أو ملتبسة باستمرار في اختبار يُعدّ عالي الحساسية والنوعية، ثم أثبت حقن دمها في خيول سلبية مصلياً أنها مصابة بفيروس فقر الدم المعدي الخيلي. يذكر ملخص فصل فقر الدم المعدي الخيلي في دليل WOAH أن العدوى في الخيول المعرّضة للفيروس تجريبياً قد تُعرف من العلامات السريرية والتغيرات الدموية والتفاعلات المصلية الإيجابية أو كشف الفيروس بالتقنيات الجزيئية. يذكر دليل MSD البيطري أن اختبار حقن الحيوانات شديد الحساسية لكشف فيروس فقر الدم المعدي الخيلي، لكنه لم يعد مستعملاً بانتظام لتشخيص المرض لأسباب لوجستية واقتصادية وأخرى تتعلق برفاه الحيوان.
تفسير النتيجة
يذكر دليل MSD البيطري أن الغالبية العظمى من الخيول المصابة بفيروس فقر الدم المعدي الخيلي تتحول إلى إيجابية مصلياً بحلول اليوم 45، مع حالات استثنائية امتدت فيها هذه الفترة 90 يوماً أو أكثر. يذكر Issel وزملاؤه، في مقالة نشرتها مجلة Veterinary Record عام 2013، أن عدم العثور على فيروس فقر الدم المعدي الخيلي بالعزل الروتيني لا ينفي في بعض الحالات وجود مستودعات للفيروس في الأنسجة أو فيروس كامن ما لم يُلجأ إلى التثبيط المناعي، ولذلك يعدّون أي استنتاج مبني على غياب الفيروس أمراً يستوجب الحذر.
مكانه في المعايير الدولية
يضع الجدول 1 في فصل فقر الدم المعدي الخيلي من دليل WOAH عزل الفيروس في درجة «مناسب في ظروف محدودة جداً» لتأكيد الحالات السريرية وحده، ويعدّه غير مناسب لإثبات خلو مجموعة الحيوانات أو الحيوان الفرد من العدوى قبل نقله، وللإسهام في سياسات الاستئصال، ولترصد انتشار العدوى، ولتقييم الحالة المناعية بعد التلقيح. تنص حاشية الجدول 1 في فصل فقر الدم المعدي الخيلي من دليل WOAH على التوصية بالجمع بين طرق متعددة لتحديد العامل الممرض تُطبَّق على عينة سريرية واحدة.