مقايسة الممتز المناعي المرتبط بالإنزيم (ELISA) للأجسام المضادة ضد Fasciola hepatica اختبار مناعي غير مباشر يُجرى على مصل الدم أو على الحليب، ومنه حليب خزان المزرعة، للكشف عن الإصابة بهذه الديدان الكبدية لدى الأبقار. وفق مراجعة Rufino-Moya وزملائه عام 2024، تطورت تقنيات تحرّي العدوى غير المباشرة لأن الكشف المباشر عن Fasciola لا يمكن في الأسابيع الأولى التي يقع فيها أشد الفعل الممرض.
ما الذي يكشفه الاختبار
الشكل غير المباشر من ELISA يكشف الأجسام المضادة المتداولة الموجّهة ضد مستضد محدد مثبّت على لوحة الاختبار، بحسب مراجعة Rufino-Moya وزملائه عام 2024. يعدّ اختيار المستضد النوعي جانباً حاسماً في تطوير مقايسة ELISA، بحسب مراجعة Rufino-Moya وزملائه عام 2024.
العينة
عينات المصل والحليب الفردي وحليب الخزان جُرّب عليها ELISA قائم على المستضد MM3، وهو جزء نقي من نواتج الإفراز والإخراج لدى Fasciola، وفق ما تورده مراجعة عام 2024. انتقل ELISA المصلي الخاص بالأبقار إلى حليب الخزان في دراسة Salimi-Bejestani وزملائه عام 2005 بعد تكييفه والتحقق منه لهذا الغرض. تذكر مراجعة عام 2024 أن الارتباط بين نتائج المصل والحليب يبقى صالحاً حتى في عينات حليب الخزان.
مبدأ الاختبار
يقوم ELISA غير المباشر على خطوتين بحسب مراجعة عام 2024: يرتبط الجسم المضاد الأولي بالمستضد، ثم يُحضَّن مع جسم مضاد ثانوي موسوم يكشف هذا الارتباط.
الاستعمالات
أتاح تطبيق ELISA على عينات حليب الخزان مراقبة وضع القطيع كله من حيث الإصابة بـ F. hepatica، كما أتاح تطبيقه على عينات الحليب الفردية تحديد نسبة الانتشار داخل القطيع، بحسب دراسة Bloemhoff وزملائه عام 2015. تبقى العدوى بـ F. hepatica في الأبقار الحلوب وعجلات التربية غالباً دون أعراض سريرية، لكن ينجم عنها انخفاض إنتاج الحليب والخصوبة، بحسب Bloemhoff وزملائه عام 2015. يبقى عدّ بيض الطفيلي في براز العائل، بحسب مراجعة عام 2024، الاختبار المباشر النموذجي قبل الموت، ويُعدّ المعيار الذهبي، غير أن الكشف البرازي لا يكون ممكناً إلا في المرحلة المزمنة التي تبدأ بعد 8-10 أسابيع من العدوى تبعاً لنوع العائل.
تفسير النتيجة
تذكر مراجعة عام 2024 أن الأجسام المضادة ضد Fasciola يمكن كشفها في المصل بدءاً من أسبوعين بعد العدوى، وأنها تبقى قابلة للكشف في عوائل مختلفة حتى 20 أسبوعاً بعد العدوى حتى بعد القضاء على الطفيليات. قد تكون نتائج التشخيص المناعي سلبية كاذبة أو إيجابية كاذبة، بحسب مراجعة عام 2024. تقتصر قدرة المستضدات البرازية (coproantigens) على كشف العدوى النشطة، وفق مراجعة عام 2024. تذكر المراجعة أن مستضدات الغلاف الخارجي لـ Fasciola التي كُيّفت لتناسب العُدد التجارية واجهت قيوداً بسبب التفاعل المتصالب. أفادت المراجعة بأن كاثيبسينات مأشوبة كشفت أجساماً مضادة موجبة في أغنام مصابة تجريبياً بعد ثلاثة أسابيع من العدوى. في دراسة Bloemhoff وزملائه عام 2015، كانت نتيجة حليب الخزان سلبية في ثلاثة قطعان، وكان لدى كل منها أقل من نصف عينات مصل الأبقار موجباً لـ F. hepatica. وصف Bloemhoff وزملاؤه ارتباطاً جيداً بين نتائج حليب الخزان ونتائج الدم الفردية في المجموعة الفرعية من القطعان الموجبة في حليب الخزان.