اختبار الإليزا للكشف عن مستضد فيروس الحمى القلاعية

ما الذي يكشفه

يعدّ دليل المنظمة العالمية لصحة الحيوان (WOAH) اختبار الإليزا (ELISA) الإجراء المفضَّل للكشف عن مستضد فيروس الحمى القلاعية (foot and mouth disease virus, FMDV) وتحديد نمطه المصلي (serotype)، ويذكر دليل MSD البيطري أن إليزا المستضد تُظهر وجود الفيروس في متجانس الظهارة المحضَّر من آفات حديثة وتحدد نمطه كذلك.

العينة

تلائم الإليزا فحص معلّقات الظهارة (epithelial suspensions) وسوائل الحويصلات ورواشح المزارع الخلوية، أما عينات البلعوم الفموي (oropharyngeal, OP) والمصل فحساسيتها غير كافية لفحصها مباشرة، وهو قيد يشاركها فيه اختبار تثبيت المتممة وجهاز التدفق الجانبي.

المبدأ

ثلاث طبقات من الأمصال تتعاقب في هذا الاختبار ذي الطراز الساندويتشي غير المباشر (indirect sandwich): أولاها أمصال أرانب مضادة للأنماط المصلية السبعة، يغطي كلٌّ منها صفًّا مختلفًا من صفوف الصفيحة متعددة الآبار، وثانيتها أمصال خنازير غينيا المضادة لكل نمط، وآخرتها مصل أرانب مضاد لخنازير غينيا مقترن بإنزيم. وتتوفر مجموعة جاهزة للاستعمال ومصادَق عليها (validated kit) تعتمد أضدادًا وحيدة النسيلة (monoclonal antibodies) منتقاة مسبقًا، تكشف ستة من الأنماط المصلية السبعة وتصنّفها.

متى يُستخدم

يُكيَّف الفحص مع المنطقة ونوع الحيوان: فأنماط SAT والنمط Asia 1 لا تُدرج روتينيًا في دول تنتمي إلى أقاليم لم تسرِ فيها هذه الأنماط قط، بينما قد يكون من المناسب، تبعًا للنوع المصاب والمنشأ الجغرافي للعينات، فحص فيروس مرض الخنازير الحويصلي (swine vesicular disease virus, SVDV) أو فيروس التهاب الفم الحويصلي (vesicular stomatitis virus, VSV) في الوقت ذاته.

تفسير النتيجة

في الإجراء الذي يصفه دليل WOAH، تُحسم القيم القريبة من 0.1 إما بإعادة الاختبار وإما بتضخيم المستضد عبر تمريره في المزرعة النسيجية وفحص الراشح بعد ظهور التأثير الممرض للخلايا (cytopathic effect, CPE)، أما ما يزيد على الخلفية بأكثر من 0.1 فتفاعل إيجابي يمكن معه أيضًا تحديد النمط المصلي للفيروس.

مكانه في دليل المنظمة العالمية لصحة الحيوان

يفضّل دليل WOAH الإليزا عمومًا على اختبار تثبيت المتممة (complement fixation test, CFT)، فهي أعلى حساسية ولا تتأثر بالعوامل المعززة للمتممة أو المضادة لها (pro- or anti-complementary factors).