تفاعل البوليميراز المتسلسل بالنسخ العكسي في الوقت الحقيقي لفيروس الحمى القلاعية

ما الذي يكشفه

يكشف تفاعل البوليميراز المتسلسل بالنسخ العكسي في الوقت الحقيقي (real-time RT-PCR) جينوم فيروس الحمى القلاعية (FMDV)، وبه يجري عادة التشخيص المخبري الأولي للمرض بحسب دليل MSD البيطري، ويشيع فيه استعمال فحصين منفصلين يستهدفان منطقتين مختلفتين من جينوم الـRNA. وهذه الفحوص عالية الحساسية، وتكشف الجينوم حتى في العينات سيئة الحفظ التي فقد فيها الفيروس قدرته على العدوى، ويذكر دليل المنظمة العالمية لصحة الحيوان (WOAH) أن حساسيتها تضاهي حساسية عزل الفيروس.

العينة

من العينات التي يمكن فحصها بطرق RT-PCR الظهارة وعينات البلعوم الفموي (OP) والحليب والمصل، إضافة إلى عضلة القلب من الحالات المصابة بالتهاب العضلة القلبية.

المبدأ

وُصفت طريقة أبسط بخطوة واحدة تجمع خطوتي النسخ العكسي والتضخيم وتستعملها المختبرات على نطاق واسع، ولا يلزم بعد التضخيم في الوقت الحقيقي كشف النواتج على هلام الأغاروز. ويمكن الاستعاضة عن الإجراءات اليدوية باستخلاص آلي للحمض النووي الكلي تتبعه برامج سحب آلي (automated pipetting) لخطوتي النسخ العكسي والتضخيم، والإجراءات الآلية ترفع عدد العينات الممكن فحصها.

تفسير النتيجة

ينصّ دليل WOAH على أن يحدد كل مختبر، مستعينًا بمواد مرجعية مناسبة، قيم دورة العتبة (cycle threshold, CT) التي تُصنَّف العينات على أساسها إيجابية أو سلبية لفيروس الحمى القلاعية. وفي الإجراء الموصوف في دليل WOAH تقل قيمة CT في العينات والشواهد الإيجابية عن 40، وتوصف العينات التي تقع قيمها بين 40 و50 بأنها حدّية (borderline) ويمكن إعادة فحصها، أما العينات الإيجابية بقوة فتقل قيمتها عن 20.0.