يكشف تحليل لطخة ويسترن (Western blot) الأضداد الموجهة إلى البروتينات البنيوية لفيروسات Capripoxvirus، بتفاعل أمصال الحيوانات المختبرة مع مستخلص خلايا مصابة بالفيروس (infected cell lysate). تصفه المنظمة العالمية لصحة الحيوان (WOAH) بأنه حساس ونوعي حين يعتمد على تفاعل المستضد P32 لفيروس مرض الجلد العقدي (lumpy skin disease virus) مع الأمصال، لكنه صعب ومكلف التنفيذ.
تحضير المستضد
بحسب WOAH تُحصد خلايا LT المصابة عند بلوغ التأثير الممرض للخلايا 90%، وتُجمَّد وتُذاب ثلاث مرات، وتُرسَّب بقاياها الخلوية بالطرد المركزي. يجوز استعمال فيروس منقى أو مستضدات مأشوبة (recombinant antigens) بديلًا عن المستضد المشتق من مزرعة الخلايا.
الإجراء
تُنقل البروتينات المفصولة في هلام SDS/PAGE كهربائيًا إلى غشاء من النيتروسليلوز (nitrocellulose membrane)، وتطلب WOAH مصلًا شاهدًا إيجابيًا وآخر سلبيًا في كل مرة.
تفسير النتيجة
تُظهر العينات الإيجابية والشاهد الإيجابي نمط تفاعل مع بروتينات أوزانها الجزيئية 67 و32 و26 و19 و17 كيلودالتون، وهي البروتينات البنيوية الرئيسية لـ Capripoxvirus، في حين لا تتفاعل الأمصال السلبية مع جميعها. يحمل البروتين 32 كيلودالتون قيمة تمييزية خاصة: فالمصل المفرط التمنيع ضد فيروسات Parapoxvirus، مثل فيروس التهاب الفم الحطاطي البقري وفيروس جدري البقر الكاذب، يتفاعل مع بعض بروتينات Capripoxvirus لكن ليس مع هذا البروتين النوعي.