اختبار الانتشار المناعي في هلام الآجار (agar gel immunodiffusion) اختبار مصلي يكشف الأضداد ضد Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis في المصل، كما يصفه مختبر تكساس إيه آند إم للتشخيص البيطري في صفحته عن فحوص داء جونز. لا يزال الانتشار المناعي في هلام الآجار، في تقدير فصل نظير السل (داء جونز) من دليل المنظمة العالمية لصحة الحيوان (WOAH)، أداة قيّمة لكشف المرض لدى الأغنام.
ما الذي يكشفه الاختبار
نظير السل (داء جونز)، كما يحدده دليل WOAH، مرض معوي التهابي مزمن لدى المجترات، عامله Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis. يذكر دليل WOAH أن نظير السل منتشر في أنحاء العالم، ويوجد في أغلب الأحيان بين المجترات الأليفة من أبقار وأغنام وماعز وإبليات وجواميس، وكذلك بين المجترات البرية من الأيليات. يذكر دليل WOAH أن الأضداد المصلية في نظير السل تصبح أكثر ثباتاً وأعلى عياراً كلما اتسعت الآفات، بما يعكس كمية المستضد الموجودة. يذكر دليل WOAH أن الأغنام المصابة بنظير السل قد تُبدي استجابة مصلية يُرجَّح كشفها في الشكل متعدد العصيات من المرض أكثر منه في الشكل قليل العصيات.
العينة
ينبغي، وفق دليل WOAH، أن يجري العمل على Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis وعلى العينات التي قد تكون مُعدية عند مستوى سلامة حيوية واحتواء يُختار بناءً على تحليل المخاطر الحيوية.
مبدأ الاختبار
يذكر دليل WOAH أن المستضد المستعمل في اختبار الانتشار المناعي في هلام الآجار لنظير السل خلاصة بروتوبلازمية خام من السلالة المخبرية M. avium 18، التي كانت تُسمّى سابقاً M. paratuberculosis 18. يشير دليل WOAH إلى أن عدة صيغ من طريقة الانتشار المناعي في هلام الآجار مستعملة في فحص نظير السل، ويذكر أن الهلام يُفحص بحثاً عن خطوط الترسيب بعد 24 ساعة و48 ساعة من الحضن. تنسب الإجراءات التشخيصية القياسية لأستراليا ونيوزيلندا (2010) الخاصة بداء جونز إلى الانتشار المناعي في هلام الآجار على المصل مزايا البساطة وانخفاض الكلفة نسبياً والنوعية العالية وقلة التأثر بنوع الحيوان، وتقابلها بعيبين هما الاستهلاك الكبير للكاشف وذاتية القراءة.
الاستعمالات
يذكر دليل WOAH أن اختبار الانتشار المناعي في هلام الآجار مفيد لتأكيد نظير السل في الأبقار والأغنام والماعز المشتبه بإصابتها سريرياً. تذكر الإجراءات التشخيصية القياسية لأستراليا ونيوزيلندا (2010) أن اختبار الانتشار المناعي في هلام الآجار لداء جونز يُستعمل على نطاق واسع لفحص الأغنام والماعز، لا الأبقار. يرى مركز CFSPH بجامعة ولاية آيوا، في صفحته عن نظير السل، أن الانتشار المناعي في هلام الآجار مفيد أيضاً في الحالات السريرية، وإن كانت مقايسات الممتز المناعي المرتبط بالإنزيم (ELISA) أكثر حساسية وأرجح في كشف الأبقار المصابة إصابة تحت سريرية.
تفسير النتيجة
يعدّ دليل WOAH نتيجة اختبار الانتشار المناعي في هلام الآجار لنظير السل إيجابية عند ظهور خط ترسيب واحد أو أكثر واضح التحديد، يتطابق مع خط مصل الشاهد الإيجابي، قبل 48 ساعة أو عندها، ويسجّل غياب أي خط ترسيب نتيجةً سلبية. تشترط الإجراءات التشخيصية القياسية لأستراليا ونيوزيلندا (2010) أن يُظهر التفاعل الإيجابي في اختبار الانتشار المناعي لداء جونز خط تطابق مع الشاهد الإيجابي، وتربط أعلى نوعية بالخطوط التي تظهر خلال 24 ساعة. تذكر الإجراءات التشخيصية القياسية لأستراليا ونيوزيلندا (2010) أن خطوط عدم التطابق قد تظهر مع استمرار الحضن في اختبار الانتشار المناعي لداء جونز وتُعدّ سلبية بوصفها تفاعلات غير نوعية، وأن خطوط التطابق الجزئي تُعدّ مشبوهة. ينبّه دليل WOAH إلى أن خطوطاً غير نوعية قد تظهر في اختبار الانتشار المناعي في هلام الآجار لنظير السل. يذكر دليل WOAH أن الأضداد المصلية ضد نظير السل قد توجد أيضاً في الحيوانات التي تعافت من العدوى. تنشأ أضداد مصلية، بحسب دليل WOAH، لدى الحيوانات الملقحة ضد نظير السل بلقاحات الخلية الكاملة، كما تنشأ بتحفيز من أمراض وعداوى متفطرية أخرى كالسل الثديي والسل الطيري. تقرّ الإجراءات التشخيصية القياسية لأستراليا ونيوزيلندا (2010) بأن دقة الاختبارات التشخيصية لداء جونز محدودة وتتأثر بعوامل المضيف وبمستوى التعرض لـM. paratuberculosis وجراثيم أخرى قريبة منها في البيئة، وبأن نتائج سلبية كاذبة وإيجابية كاذبة ستحدث. يستشهد دليل WOAH بدراسة Hope وزملائه (2000) التي أبلغت، بالقياس إلى نتائج الفحص النسيجي، عن نوعية لاختبار الانتشار المناعي في هلام الآجار لنظير السل بين 99 و100% وحساسية بين 38 و56% (بفاصل ثقة 95%). يذكر دليل WOAH تقارير تفيد بأن اختبار الانتشار المناعي في هلام الآجار يقدم في المجترات الصغيرة في نيوزيلندا وأستراليا حساسية ونوعية أعلى قليلاً مما تعطيه مقايسات ELISA لنظير السل.
مكانه في المعايير الدولية
لم يعد دليل WOAH يوصي في الأبقار باختباري تثبيت المتممة والانتشار المناعي في هلام الآجار، ويصف حساسيتهما ونوعيتهما في نظير السل بأنهما أضعف. يضع جدول طرق التشخيص في فصل نظير السل من دليل WOAH علامتين نجميتين بجوار اختبار الانتشار المناعي في هلام الآجار، وتعنيان بحسب مفتاح الجدول أنه مناسب للاستعمال في الأغنام والماعز، وتتراوح درجاته في الجدول بحسب الغرض بين «موصى به لهذا الغرض» و«مناسب في ظروف محدودة جداً».