اختبار تثبيت المتممة (complement fixation test) واحد من الاختبارات المصلية الشائعة الاستعمال في داء جونز إلى جانب مقايسة الممتز المناعي المرتبط بالإنزيم الممتصة واختبار الانتشار المناعي في هلام الآجار، بحسب الإجراءات التشخيصية القياسية لأستراليا ونيوزيلندا (2010). يذكر فصل نظير السل (داء جونز) في دليل المنظمة العالمية لصحة الحيوان (WOAH) أن اختبار تثبيت المتممة ظل لسنوات طويلة الاختبار القياسي المستعمل في الأبقار، وأنه يعمل جيداً على الحيوانات المشتبه بإصابتها سريرياً، لكنه يفتقر إلى النوعية الكافية لاستعماله في عموم الحيوانات لأغراض المكافحة.
ما الذي يكشفه الاختبار
يندرج نظير السل (داء جونز) في دليل WOAH ضمن التهابات الأمعاء المزمنة لدى المجترات، ويُعزى إلى Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis. يذكر دليل WOAH أن نظير السل ذو انتشار عالمي، وأنه يُشاهد في الغالب بين المجترات الأليفة كالأبقار والأغنام والماعز والإبليات والجواميس، وبين المجترات البرية كالأيليات. يذكر دليل WOAH أن كشف الاستجابة الخلوية الجهازية في نظير السل يسبق إنتاج الأضداد القابلة للكشف، وأن الأضداد المصلية تُكشف في وقت لاحق للمناعة الخلوية وقد توجد أيضاً في حيوانات تعافت من العدوى. يذكر دليل WOAH أن الأضداد المصلية في نظير السل تزداد ثباتاً وعياراً مع اتساع الآفات، بما يعكس كمية المستضد الموجودة.
العينة
يحيل دليل WOAH تحديد مستوى السلامة الحيوية والاحتواء الذي ينبغي أن تُعالج عنده Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis والعينات المحتمل عدواها إلى تحليل المخاطر الحيوية.
مبدأ الاختبار
يذكر دليل WOAH أن المستضد في اختبار تثبيت المتممة لنظير السل خلاصة مائية من جراثيم نُزعت منها الدهون، من السلالة M. paratuberculosis 316F، وأن Mycobacterium avium D9 يمكن استعماله أيضاً. تذكر الإجراءات التشخيصية القياسية لأستراليا ونيوزيلندا (2010) أن اختبار تثبيت المتممة لداء جونز يُجرى باستعمال السلالة M. avium D4، الأسهل زراعة والتي تعطي تفاعلية مماثلة للمستضدات المحضرة من M. paratuberculosis. يذكر دليل WOAH أن إجراءات متنوعة لاختبار تثبيت المتممة لنظير السل تُستعمل دولياً، وأنه لا توجد أمصال نموذجية دولية بوحدات تثبيت متممة معيارية تُستعمل مرجعاً.
الاستعمالات
كثيراً ما تطلب البلدان المستوردة للأبقار من أستراليا ونيوزيلندا اختبار تثبيت المتممة لداء جونز، مع أن الإجراءات التشخيصية القياسية للبلدين (2010) ترى أن حساسيته ونوعيته لا تكفيان لاستعماله في عموم الحيوانات للمكافحة أو التشخيص أو الشهادات، وأنه يعمل جيداً في الحيوانات المشتبه بإصابتها سريرياً. يلفت دليل MSD البيطري، في فصل نظير السل في المجترات، إلى غياب التوحيد القياسي في اختبار تثبيت المتممة، ويردّه إلى اختلاف مواصفات كثير من كواشفه بين البلدان، رغم أن بلداناً كثيرة لا تزال تشترطه لاستيراد الحيوانات. يعدّ مركز CFSPH بجامعة ولاية آيوا، في صفحته عن نظير السل، اختبار تثبيت المتممة من الاختبارات المتاحة المفيدة في الحالات السريرية، مع أن مقايسات ELISA أكثر حساسية وأرجح في التقاط الأبقار ذات العدوى تحت السريرية. يذكر دليل WOAH أن الاختبار المصلي الشائع الاستعمال لنظير السل في الأبقار هو مقايسة الممتز المناعي المرتبط بالإنزيم (ELISA).
تفسير النتيجة
ينص دليل WOAH على أنه ينبغي تفسير نتائج اختبار تثبيت المتممة لنظير السل في ضوء العلامات السريرية والنتائج المخبرية الأخرى. تتكوّن المناعة الخلوية والأضداد المصلية معاً، وفق دليل WOAH، لدى الحيوانات التي لُقّحت ضد نظير السل بلقاحات الخلية الكاملة، وتحفّزهما كذلك أمراض وعداوى متفطرية أخرى منها السل الثديي والطيري. تقرّ الإجراءات التشخيصية القياسية لأستراليا ونيوزيلندا (2010) بأن دقة اختبارات تشخيص داء جونز محدودة وتتأثر بعوامل المضيف وبمستوى التعرض لـM. paratuberculosis وجراثيم قريبة منها في البيئة، وبأن النتائج السلبية الكاذبة والإيجابية الكاذبة ستحدث. تفوق حساسية مقايسة ELISA حساسية اختبار تثبيت المتممة لدى الحاملات المصابة دون أعراض وتضاهيها في الحالات السريرية، بحسب دليل WOAH الذي يعدّ هذه المقايسة حالياً أعلى الاختبارات حساسية ونوعية لكشف الأضداد المصلية ضد Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis في الأبقار. تذكر الإجراءات التشخيصية القياسية لأستراليا ونيوزيلندا (2010) أن اختبار تثبيت المتممة كان الاختبار القياسي للأبقار سنوات طويلة، لكنه يفتقر إلى الحساسية والنوعية مقارنةً بمقايسة ELISA في داء جونز. يذكر دليل MSD البيطري أن اختبار تثبيت المتممة لنظير السل أقل دقة، بحسب التقارير، من الاختبارات المصلية الأخرى.
مكانه في المعايير الدولية
يذكر دليل WOAH أن اختبار تثبيت المتممة لنظير السل غير موصى به لأغراض المكافحة ولا لفحص الحيوان الفرد قبل نقله دولياً. لا يوصي دليل WOAH بعد الآن باستعمال تثبيت المتممة ولا الانتشار المناعي في هلام الآجار لدى الأبقار، وهما في نظير السل اختباران أدنى حساسيةً ونوعيةً بحسب الدليل.