اختبار تثبيط النمو للمفطورة الدجاجية الإنتانية والمفطورة المفصلية

اختبار تثبيط النمو (Growth Inhibition test، ويُختصر GI) اختبار مخبري يُجرى على عزلات المفطورات من الطيور لتحديد نوعها، إذ يثبّط مصل نوعي نمو المفطورة فيتيح ذلك تعريفها. تعدّ المنظمة العالمية لصحة الحيوان (WOAH) المفطورة الدجاجية الإنتانية (Mycoplasma gallisepticum) والمفطورة المفصلية (M. synoviae) أهم المفطورات الممرضة للطيور، وترتبط الأولى بـالعدوى بالمفطورة الدجاجية الإنتانية التي تُعدّ مهمة خاصة في الدجاج والديك الرومي.

ما الذي يكشفه الاختبار

تذكر المنظمة العالمية لصحة الحيوان (WOAH) أن طرائق مناعية وطرائق لكشف الحمض النووي تُستعمل لتعريف عزلات المفطورات، وأن تثبيط النمو واحد منها. يورد مركز الأمن الغذائي والصحة العامة (CFSPH) بجامعة ولاية آيوا اختبار تثبيط النمو بين الطرائق التي تُعرَّف بها المفطورة الدجاجية الإنتانية المزروعة، ومعه تثبيط الاستقلاب والتلوين بالبيروكسيداز المناعي والتألق المناعي غير المباشر وتفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) وغيره من طرائق الحمض النووي.

العينة

العينة التي يعمل عليها الاختبار مزرعة نقية مستنسخة من الكائن المراد فحصه، وتنصح المنظمة العالمية لصحة الحيوان (WOAH) باختبار عدة تخفيفات منها. تحتاج مزرعة اختبار تثبيط النمو وتثبيط الاستقلاب إلى مستعمرة واحدة منقّاة، بينما لا يشترط ذلك في اختباري التألق المناعي غير المباشر والبيروكسيداز المناعي، بحسب المنظمة العالمية لصحة الحيوان (WOAH). تُزرع عينات الطيور في المختبر على آجار المفطورات وفي المرق معاً، وفق المنظمة العالمية لصحة الحيوان (WOAH)، ويمكن عادة تمييز مستعمرات المفطورات على الوسط الصلب وإن غاب عنها مظهر «البيضة المقلية» النموذجي. تتطلب زراعة المفطورات أوساطاً اصطناعية متخصصة مدعّمة بمكملات غذائية معقدة، بحسب دليل MSD البيطري، الذي يصف هذه الكائنات بأنها صعبة الاستنبات. يذكر دليل MSD البيطري أن نمو المفطورات في المرق وعلى الآجار بطيء ويستغرق من 5 إلى 21 يوماً، وأن المفطورة المفصلية أشد تطلباً من المفطورة الدجاجية الإنتانية فتحتاج في الوسط إلى مصل (يُفضَّل مصل الخنزير) وإلى ثنائي نيوكليوتيد النيكوتيناميد الأدينين (NAD). توصي المنظمة العالمية لصحة الحيوان (WOAH) بإبقاء المزارع المأخوذة من مواد حقلية مدة 20 يوماً على الأقل قبل التخلص منها.

مبدأ الاختبار

يقوم مبدأ اختبار تثبيط النمو على تثبيط المصل النوعي لنمو المفطورة المزروعة، ويُستدل بهذا التثبيط على النوع. يتطلب اختبار تثبيط النمو، بحسب المنظمة العالمية لصحة الحيوان (WOAH)، أمصالاً عالية العيار وأحادية النوعية محضّرة في مضيفات من الثدييات، لأن أمصال الدواجن لا تثبّط نمو المفطورة دائماً بكفاءة.

تفسير النتيجة

تقرر المنظمة العالمية لصحة الحيوان (WOAH) أن التفاعلات الكيميائية الحيوية، كتخمير الغلوكوز وعدم تحليل الأرجينين، قد تعين على التعريف لكنها غير نوعية للمفطورة الدجاجية الإنتانية أو المفصلية، وتستلزم تنقية المزرعة بالاستنساخ. تتشابه المفطورة المقلِّدة (Mycoplasma imitans) مع المفطورة الدجاجية الإنتانية مصلياً وكيميائياً حيوياً، وقد عُزلت في بعض البلدان من البط والإوز وأحياناً من طيور غير داجنة أخرى، وفق المنظمة العالمية لصحة الحيوان (WOAH). تذكر المنظمة العالمية لصحة الحيوان (WOAH) أن طرائق حيوية جزيئية نوعية قد تميّز المفطورة المقلِّدة عن المفطورة الدجاجية الإنتانية. تفيد المنظمة العالمية لصحة الحيوان (WOAH) بأن التألق المناعي غير المباشر والبيروكسيداز المناعي يكشفان أكثر من نوع من المفطورات في العينة، لأن المستعمرات النوعية للمصل وحدها تتفاعل.

مكانه في المعايير الدولية

تصف المنظمة العالمية لصحة الحيوان (WOAH) في دليلها البري اختبار تثبيط النمو بأنه قليل الحساسية نسبياً. يرد في دليل المنظمة العالمية لصحة الحيوان (WOAH) البري أن اختباري التألق المناعي غير المباشر والبيروكسيداز المناعي يمكن عدّهما بسيطين وحساسين ونوعيين. توجب المنظمة العالمية لصحة الحيوان (WOAH) أن تُجرى المناولات المخبرية للمفطورة الدجاجية الإنتانية والمفصلية وفق إجراءات سلامة حيوية واحتواء مناسبة يحددها تحليل المخاطر البيولوجية.