عزل المفطورة الدجاجية الإنتانية والمفطورة الزليلية على الأوساط الزرعية

عزل المفطورة الدجاجية الإنتانية (Mycoplasma gallisepticum) والمفطورة الزليلية (M. synoviae) على الأوساط الزرعية اختبار مخبري يُجرى على الطيور، ويثبت وجود الكائن بتنميته في وسط خالٍ من الخلايا. تصف المنظمة العالمية لصحة الحيوان (WOAH) المفطورة الدجاجية الإنتانية والمفطورة الزليلية بأنهما الأهم بين مفطورات ممرضة عدة تسبب داء المفطورات الطيرية، ومنه العدوى بالمفطورة الدجاجية الإنتانية.

ما الذي يكشفه الاختبار

تذكر WOAH أن المفطورة الزليلية قد تسبب مرضاً تنفسياً والتهاب الغشاء الزليلي وتغيراً في قشرة البيض وانخفاضاً في إنتاجه وخفضاً لدرجة الذبائح، وقد تنتهي إلى عدوى صامتة. كشف الحمض النووي مباشرة في الأنسجة المصابة أو في المسحات طريق ثانٍ تذكره المنظمة العالمية لصحة الحيوان (WOAH) لتأكيد وجود المفطورتين، إلى جانب عزل الكائن في وسط خالٍ من الخلايا.

العينة

تذكر WOAH أن عينات العزل قد تكون مسحات من الأعضاء أو الأنسجة، أو إفرازات، أو متجانسات نسيجية مخففة، أو شفطات من الجيوب تحت الحجاج أو التجاويف المفصلية، أو مواد من صفار البيض أو الأجنة، وأن العلامات السريرية والآفات تؤثر في اختيار العينة. تعدّ WOAH مسحة القصبة الهوائية أفضل عينة في الحيوانات الحية لمعظم أنواع المفطورات، وتضيف أن بالإمكان لأغراض العزل أخذ مسحات من شق المنخر الخلفي (choanal cleft). عند توفر طيور نافقة يمكن إجراء العزل، بحسب المنظمة العالمية لصحة الحيوان (WOAH)، بمسحات من القصبة الهوائية العليا و/أو الوسطى والرئتين والأكياس الهوائية وقناة البيض والمفاصل. توصي WOAH باختبار جميع العينات في أقرب وقت بعد جمعها، وبإرفاق كيس تبريد أو وسيلة تبريد أخرى عند نقلها لأن المفطورتين تموتان سريعاً في درجة حرارة الغرفة.

مبدأ الاختبار

يقوم العزل على تنمية المفطورة على أوساط اصطناعية متخصصة، إذ يذكر دليل MSD البيطري أنها كائنات متطلبة لصغر جينومها وغياب كثير من مساراتها الاستقلابية، فيلزم لعزلها إضافات غذائية معقدة. تحتوي أوساط المفطورات عموماً، بحسب المنظمة العالمية لصحة الحيوان (WOAH)، على بروتين مهضوم وقاعدة منقوع لحم مدعّمة بمصل أو جزء منه، مع عوامل خميرة وغلوكوز ومثبطات للبكتيريا. يُستعمل الوسط الذي طوّره فري وزملاؤه على نطاق واسع في الولايات المتحدة ودول أخرى لعزل المفطورتين وفق المنظمة العالمية لصحة الحيوان (WOAH)، وتذكر نشرة مركز الأمن الغذائي والصحة العامة (CFSPH) بجامعة ولاية أيوا أن المفطورة الدجاجية الإنتانية تُعزل على أوساط مفطورات متعددة منها وسط فري. يشترط العزل الأولي للمفطورة الزليلية، بحسب المنظمة العالمية لصحة الحيوان (WOAH)، وجود النيكوتيناميد أدينين ثنائي النوكليوتيد (NAD) في الوسط، وقد يُستغنى عنه عند زرع المفطورة الدجاجية الإنتانية. يضيف دليل MSD البيطري أن المفطورة الزليلية أشد تطلباً من المفطورة الدجاجية الإنتانية، وأن نموها في الأوساط يستلزم مصلاً (يفضّل مصل الخنزير) إلى جانب NAD. توصي WOAH بتحضير تخفيفات متسلسلة للعينات في مرق المفطورات، لأن الأضداد النوعية أو المضادات الحيوية أو المواد المثبطة الموجودة في الأنسجة قد تثبط نمو المفطورة. تُلقَّح العينات، بحسب المنظمة العالمية لصحة الحيوان (WOAH)، على آجار المفطورات وفي المرق معاً، وقد يساعد الوسط الصلب في كشف المفطورات بطيئة النمو التي قد تتغلب عليها الرمّامات في المرق. تشدد WOAH على اختبار كل دفعة جديدة من الوسط بمزارع حديثة العزل من المفطورة الدجاجية الإنتانية قليلة التمريرات المخبرية، لأن بعض المكونات، وبخاصة مستخلص الخميرة والمصل، تتفاوت في قدرتها على دعم النمو. تُحضَّن الأطباق الملقّحة عند 37 درجة مئوية في حاويات محكمة الإغلاق وفق المنظمة العالمية لصحة الحيوان (WOAH)، ويصف دليل MSD البيطري النمو في المرق وعلى الآجار بأنه بطيء (5–21 يوماً). تُفحص الأطباق يومياً في الأيام الأولى بالمجهر المجسّم بحثاً عن المستعمرات ثم بوتيرة أقل، وتوصي المنظمة العالمية لصحة الحيوان (WOAH) بحفظ المزارع المأخوذة من مواد حقلية عشرين يوماً على الأقل قبل التخلص منها.

الاستعمالات

يُستعمل العزل لتأكيد التشخيص، إذ يذكر دليل MSD البيطري أن تشخيص عدوى المفطورة الدجاجية الإنتانية ينبغي تأكيده بالعزل من مسحات الجيوب تحت الحجاج والقرينات الأنفية وشق المنخر الخلفي والقصبة الهوائية والأكياس الهوائية والرئتين أو الملتحمة. يذكر دليل MSD البيطري في فصل المفطورة الزليلية أن المتفاعلين مصلياً يُؤكَّدون بعزل مستعمرات المفطورة وتحديد هويتها، أو باختبار تثبيط التراص الدموي. يذكر دليل MSD البيطري أن الاختبارات الجزيئية شائعة الاستعمال في كشف عدوى المفطورات في الدواجن وتوصيفها، بسبب طبيعة المفطورة المتطلبة وصعوبة عزلها. تذكر نشرة CFSPH أن المفطورة الدجاجية الإنتانية قد يصعب أحياناً استرجاعها بالزرع.

تفسير النتيجة

تُقرأ مزارع المرق بمتابعة تغير اللون و/أو العكارة يومياً، وتذكر WOAH أن معظم المفطورات، ومنها المفطورة الدجاجية الإنتانية والزليلية، تستقلب السكر منتجة حمضاً يحوّل لون الوسط من الأحمر أو البرتقالي إلى الأصفر. يتحول لون المرق من الأحمر أو البرتقالي إلى أحمر قوي أو فوشيا، بحسب المنظمة العالمية لصحة الحيوان (WOAH)، حين تحلل مفطورات أخرى غير المفطورة الدجاجية الإنتانية والزليلية الأرجينين فتنشأ ظروف قلوية. يُنقل أي نمو ظاهر في المرق فوراً إلى وسط صلب، وكذلك المرق الذي لم يتغير لونه بعد 7–14 يوماً، وفق المنظمة العالمية لصحة الحيوان (WOAH). قد تظهر مستعمرات بكتيرية في التمرير الأول، وتذكر WOAH أنها غالباً أكثر تصبغاً ولا تستمر في التمرير على أوساط المفطورات. يمكن في العادة تمييز مستعمرات المفطورة على الوسط الصلب، وفق المنظمة العالمية لصحة الحيوان (WOAH)، وإن لم يكن لها دائماً مظهر البيضة المقلية المعروف. تساعد التفاعلات الكيميائية الحيوية، مثل تخمر الغلوكوز وعدم تحلل الأرجينين، في تحديد هوية العزلات، لكن WOAH تنبه إلى أنها غير نوعية للمفطورة الدجاجية الإنتانية أو الزليلية وتستلزم تنقية المزرعة بالاستنساخ.

السلامة المخبرية

تنص WOAH على أن التعامل المخبري مع المفطورتين ينبغي أن يتم بإجراءات سلامة حيوية واحتواء مناسبة تحددها دراسة المخاطر البيولوجية. تحذر WOAH من أن أسيتات الثاليوم قد تكون سامة للإنسان، وتوجب اتباع احتياطات استعمالها.