اختبار تفاعل البوليميراز المتسلسل اللحظي (Real-time PCR) للمفطورة الدجاجية الإنتانية والمفطورة المصلية (Mycoplasma gallisepticum وMycoplasma synoviae) فحص جزيئي يُجرى على الطيور، وتذكر المنظمة العالمية لصحة الحيوان (WOAH) أن له عُدَداً تجارية متاحة وإجراءات مختبرية داخلية منشورة عدة. يُستعمل التفاعل اللحظي اليوم عادةً في تشخيص العدوى بالمفطورة الدجاجية الإنتانية بحسب دراسة نُشرت في مجلة Poultry Science عام 2026، وتصف الدراسة هذه التقنية القائمة على كشف DNA المسبّب بأنها سريعة وحساسة.
ما الذي يكشفه الاختبار
تحدد WOAH في فصلها عن داء المفطورات الطيري هدف التضخيم في المفطورة الدجاجية الإنتانية بجين mgc2، وفي المفطورة المصلية بمنطقة 16S–23S ISR. أنشأ باحثون في دراسة منشورة في Poultry Science عام 2026 ثلاثة اختبارات تفاعل بوليميراز متسلسل لحظي (qPCR) مزدوجة مستقلة، يكشف كل منها في آن واحد سلالة لقاح بعينها والنمط البري من المفطورة الدجاجية الإنتانية. طُوّرت في دراسة منشورة في Poultry Science عام 2025 طريقة qPCR مزدوجة بمجسّات TaqMan تقوم على تعدد شكل نيوكليوتيدي مفرد في الموضع 367 من جين obg، وتهدف إلى التمييز بين سلالة اللقاح MS-H وسلالات الحقل للمفطورة المصلية.
العينة
يعدّ دليل WOAH مسحة الرغامى أفضل عينة في الحيوانات الحية لمعظم أنواع المفطورات، ويذكر أن بالإمكان لأغراض العزل أخذ مسحات من شق المنخر الخلفي (choanal cleft) أيضاً. تذكر دراسة نُشرت في Poultry Science عام 2026 أن الكشف الروتيني عن المفطورة الدجاجية الإنتانية يتم بمسح الرغامى أو شق المنخر الخلفي. في دراسة على دجاجات بياضة فتيّة تجارية أُخذت مسحات من شق المنخر الخلفي ومن الرغامى وقُدّرت أعداد المفطورة الدجاجية الإنتانية بالتفاعل اللحظي، ووُجد في شق المنخر الخلفي نحو 26 ضعف المكافئات الجينومية الموجودة في الرغامى عبر جميع فواصل أخذ العينات. شمل عمل qPCR المزدوج المنشور في Poultry Science عام 2026 جمع 660 مسحة من شق المنخر الخلفي من قطعان دجاج بياض وأمهات في مقاطعات صينية عدة هي شاندونغ وجيانغسو وخبي ومنطقة نينغشيا. استُخلص الـDNA في دراسة 2025 عن سلالة اللقاح MS-H من المسحات والسلالات المزروعة بطريقة الغليان قبل إجراء qPCR. استُخلص الـDNA في دراسة جنوب أفريقية نُشرت في BMC Infectious Diseases عام 2024 من مسحات الرغامى وعينات البراز، ثم أُجري qPCR على جزأين من جيني 16S rRNA وvlhA للكشف عن المفطورتين.
مبدأ الاختبار
يعتمد التفاعل اللحظي على مجسّات مُعلَّمة بمادة فلورية، وتذكر WOAH أن استعماله يتزايد وأنه يقصّر زمن الكشف مقارنةً بالتفاعل التقليدي. تذكر WOAH أن المجسّات الفلورية النوعية تتجنب تلوثاً محتملاً بعد التضخيم، وإن كانت تزيد كلفة التحليل. طُوّرت التفاعلات اللحظية النوعية لكل نوع، بحسب WOAH، بهدف رفع عدد العينات التشخيصية التي يمكن معالجتها. يُجرى الفحص الموصوف في دليل WOAH تضخيماً مزدوجاً يشمل شاهد تضخيم داخلياً (IAC)، ويمكن إضافة عُدّة تجارية لهذا الشاهد إلى خليط التضخيم لتقليل احتمال النتائج السلبية الكاذبة. يُلتقط في الفحص الموصوف في دليل WOAH الإشارة الفلورية الصادرة عن مجسّ المفطورة وشاهد التضخيم الداخلي في قناة الكشف المناسبة خلال خطوة الاستطالة. أُجري في دراسة مصرية نُشرت في Pathogens عام 2023 تحليل لمنحنى الانصهار بعد تفاعل qRT-PCR مباشرة لتأكيد نوعية ناتج التفاعل. ذُكر في وصف دليل WOAH للفحص حدّ كشف يبلغ 10 نسخ من DNA المفطورة المصلية ونسخة واحدة من DNA المفطورة الدجاجية الإنتانية في كل تفاعل. بلغ حدّ الكشف في اختبارات qPCR المزدوجة الثلاثة للتمييز بين سلالات لقاح المفطورة الدجاجية الإنتانية والنمط البري 10 نسخ لكل ميكرولتر، بحسب الدراسة المنشورة عام 2026.
الاستعمالات
تذكر دراسة نُشرت عام 2026 أن التحصين باللقاحات الحية الموهّنة ضد المفطورة الدجاجية الإنتانية يغيّر مستويات الأضداد في المضيف، ما يجعل التمييز بين عدوى سلالة اللقاح وعدوى السلالة البرية مستحيلاً بالطرق المصلية التقليدية. تعدّ دراسة نُشرت في Poultry Science عام 2025 أن التفريق الدقيق بين سلالة اللقاح MS-H وسلالات الحقل أساسي لتطبيق اللقاح بفاعلية ولاستئصال المفطورة المصلية من الدواجن. كشف اختبار SYBR Green qRT-PCR لجين mgc2 في الدراسة المصرية المنشورة في Pathogens عام 2023 إيجابية 69% من المسحات غير المزروعة، مقابل 89% من المسحات المأخوذة من مرق PPLO بعد زرعه 48 ساعة.
تفسير النتيجة
خلصت دراسة على دجاجات بياضة فتيّة إلى أن موضع أخذ المسحة أثّر في تعداد المفطورة الدجاجية الإنتانية المقيس بالتفاعل اللحظي، من دون أن يضيف فاصل أخذ العينات تأثيراً آخر. لاحظ مؤلفو دراسة qPCR المزدوجة المنشورة عام 2026 أن أياً من العينات السريرية لم يكن موجباً لأكثر من سلالة لقاح واحدة، ولم تكن أي عينة موجبة لسلالة لقاح والنمط البري معاً. أظهر اختبار حلقي أوروبي تبايناً في النوعية بين مختبرات تستعمل التقنية نفسها، وهو تباين يشير بحسب الدراسة إلى أثر القائم بالعمل واختلاف تقييم البيانات الخام. تُلغي طريقة qPCR المزدوجة القائمة على تعدد الشكل في جين obg، بحسب دراسة 2025، أثر سلالات obg المرتدة مما يتيح تمييزاً دقيقاً للقاح MS-H عن سلالات الحقل، وقد وُصفت بعلو الحساسية والنوعية والتكرارية.
مكانه في المعايير الدولية
ترى WOAH في فصلها عن داء المفطورات الطيري أن زرع المفطورات في المختبر يجد في فحوص PCR بديلاً جيداً، لأن هذه الفحوص تعمل على العينات السريرية مباشرة أو على العزلات المزروعة. تُستعمل فحوص PCR روتينياً في مختبرات كثيرة وتتميز بحساسية جيدة، بحسب WOAH.