عزل فيروس مرض الخيل الأفريقي (Virus isolation) طريقة يذكر دليل المنظمة العالمية لصحة الحيوان (WOAH) أنها نجحت في استخراج الفيروس مباشرةً على خطوط خلوية من الثدييات ومن الحشرات، منها خلايا كلية الهامستر الوليد (BHK-21) وخلايا كلية القرد الأخضر الأفريقي (Vero) وخطوط خلوية من Culicoides والبعوض. يؤكد دليل WOAH أن إجراء عزل الفيروس وتحديد نمطه المصلي مهم بشكل خاص كلما ظهرت فاشيات لمرض الخيل الأفريقي خارج المناطق المتوطنة، لاختيار نمط مصلي مماثل في اللقاح.
ما الذي يكشفه الاختبار
يدرج فصل مرض الخيل الأفريقي في دليل WOAH هذا المرض ضمن الأمراض الفيروسية المعدية غير السارية بالتماس، ويذكر أنه يشمل كل أنواع الخيليات ويغيّر وظائف الجهازين التنفسي والدوري، وأن مسببه فيروس orbivirus من فصيلة Reoviridae. يذكر دليل WOAH أن ما لا يقل عن ناقلين حقليين يشتركان في نقل فيروس مرض الخيل الأفريقي، وهما Culicoides imicola وC. bolitinos. يذكر دليل WOAH أن الأنماط المصلية التسعة لفيروس مرض الخيل الأفريقي متمايزة مستضدياً وحُددت باختبار التعادل الفيروسي، وأن تفاعلاً متصالباً لوحظ بين بعض أزواجها، في حين لا يحدث تفاعل متصالب مع فيروسات orbivirus الأخرى المعروفة. يذكر دليل WOAH أن فيروس مرض الخيل الأفريقي يمكن تعطيله بتسخينه إلى 72 درجة مئوية مدة 120 دقيقة، وهو ما تأكد بثلاث تمريرات عمياء على خط خلايا Vero.
العينة
يذكر دليل WOAH أن فيروس مرض الخيل الأفريقي يمكن عزله من الدم المأخوذ في المرحلة الحموية المبكرة. تشمل الأنسجة المفضلة الأخرى لعزل فيروس مرض الخيل الأفريقي، وفق دليل WOAH، الطحال والرئة والعقد اللمفية المأخوذة عند الصفة التشريحية. يعدّ دليل WOAH الدم الكامل غير المتخثر من الحيوانات المريضة في بداية الطور الحموي، وقطعاً صغيرة من الطحال والرئة والعقد اللمفية من الحيوانات النافقة، العينات المختارة لتشخيص مرض الخيل الأفريقي. يعدّ دليل WOAH اختيار العينات ونقلها الآمن إلى المختبر جانباً بالغ الأهمية في تشخيص مرض الخيل الأفريقي. يذكر دليل WOAH أنه لا يوجد دليل على أن الإنسان قد يُصاب بأي سلالة حقلية من فيروس مرض الخيل الأفريقي، سواء بمخالطة حيوانات مصابة طبيعياً أو تجريبياً أو بالتعامل مع الفيروس في المختبر. يقرر دليل WOAH أنه ينبغي إخضاع أعمال المختبر على فيروس مرض الخيل الأفريقي لاحتواء ملائم يُستدل على مستواه من تحليل المخاطر الحيوية.
مبدأ الاختبار
يوضح دليل WOAH أن مستحضرات العينات في عزل فيروس مرض الخيل الأفريقي يمكن تلقيحها في مزارع خلوية، مثل خلايا BHK-21 وخلايا القرد المستقرة (MS) وخلايا Vero وخلايا الحشرات، أو حقنها وريدياً في البيض المحتضن. يذكر دليل WOAH أن السائل الطافي من خلايا الحشرات المصابة بفيروس مرض الخيل الأفريقي يمكن تمريره بعد ذلك إلى خلايا الثدييات، فتُظهر التأثير الاعتلالي الخلوي بعد تمريرة أو تمريرتين.
الاستعمالات
يصف دليل WOAH التشخيص المختبري لمرض الخيل الأفريقي بأنه ضروري، ويضيف أن علاماته السريرية وآفاته، مع أنها مميزة، قد يُخلط بينها وبين علامات أمراض الخيل الأخرى. يذكر دليل WOAH أن مرض الخيل الأفريقي متوطن في أفريقيا جنوب الصحراء الكبرى، وأن فاشيات متفرقة منه وقعت في شمال أفريقيا والشرق الأوسط وفي أوروبا في إسبانيا والبرتغال. يذكر دليل WOAH أن الخيل أكثر الفصيلة الخيلية قابلية للإصابة بمرض الخيل الأفريقي، بمعدل نفوق بين 50 و95%، ثم البغال بمعدل نفوق يقارب 50%. يذكر دليل WOAH أن اختبار التعادل الفيروسي كان حتى وقت قريب الطريقة المختارة لتنميط فيروس مرض الخيل الأفريقي والاختبار المرجعي الذهبي للتعرف على العزلات الحقلية باستعمال أمصال مضادة نوعية للنمط، وأن نتائجه تستغرق خمسة أيام أو أكثر. تستطيع الطرق الجزيئية، بحسب دليل WOAH، تحديد نمط فيروس مرض الخيل الأفريقي بسرعة في عينات حقلية إيجابية كثيرة، ومع ذلك يرى دليل WOAH أنه ينبغي الإبقاء على التعادل الفيروسي معياراً ذهبياً لتنميط عزلات الفيروس مصلياً. لتحديد النمط المصلي لفيروس مرض الخيل الأفريقي واختيار اللقاح الصحيح، ينبغي بحسب دليل WOAH اللجوء إلى التعادل الفيروسي أو تفاعل البوليميراز المتسلسل بالنسخ العكسي النوعي للنمط أو تحديد التسلسل في أبكر وقت ممكن من الفاشية. يذكر دليل WOAH أنه ينبغي، إن أمكن، الاعتماد على أكثر من اختبار في تشخيص فاشية مرض الخيل الأفريقي، ولا سيما حالتها الأولى.
تفسير النتيجة
يذكر دليل WOAH أن التأثير الاعتلالي الخلوي قد يظهر في خلايا الثدييات بين اليوم الثاني واليوم العاشر بعد إصابتها بفيروس مرض الخيل الأفريقي. ينص دليل WOAH على أنه ينبغي إجراء ثلاث تمريرات عمياء قبل اعتبار العينات سلبية في عزل فيروس مرض الخيل الأفريقي. يذكر دليل WOAH أن خلايا الحشرات لا يُلاحظ فيها التأثير الاعتلالي الخلوي، لكن وجود فيروس مرض الخيل الأفريقي يمكن كشفه في سائلها الطافي بعد 5 إلى 7 أيام بتفاعل البوليميراز المتسلسل الآني بالنسخ العكسي. يلفت دليل WOAH إلى أن النتيجة الإيجابية لتفاعل البوليميراز المتسلسل بالنسخ العكسي في حالة فيروس مرض الخيل الأفريقي لا تعني بالضرورة وجود فيروس معدٍ، لأن التفاعل يكشف الحمض النووي النوعي للفيروس حتى بعد أن يصبح غير حي وعاجزاً عن إحداث عدوى جديدة في الحشرات أو خلايا الثدييات.
مكانه في المعايير الدولية
يعدّ جدول دليل WOAH لمرض الخيل الأفريقي عزل الفيروس غير مناسب لإثبات خلو مجموعة حيوانية من العدوى، ولا لدعم سياسات الاستئصال، ولا للترصد، ولا لتحديد الحالة المناعية بعد التحصين. يوصي فصل مرض الخيل الأفريقي في دليل WOAH بأن تتضافر عدة طرق للتعرف على العامل الممرض في فحص عينة سريرية واحدة.