اختبار التعادل الفيروسي (virus neutralisation) اختبار مصلي يذكر دليل المنظمة العالمية لصحة الحيوان (WOAH) أنه يكشف الأجسام المضادة النوعية للنمط المصلي لفيروس مرض الخيل الأفريقي. يذكر دليل WOAH أن الأجسام المضادة لفيروس مرض الخيل الأفريقي يمكن إظهارها بعدة طرق مصلية، منها اختبار تثبيت المتممة ومقايسة الممتز المناعي المرتبط بالإنزيم (ELISA) واللطخة المناعية والتعادل الفيروسي، وأن التعادل الفيروسي من بينها هو المستعمل لتحديد النمط المصلي.
ما الذي يكشفه الاختبار
بحسب دليل WOAH، يسبب فيروسٌ من جنس orbivirus من فصيلة Reoviridae مرضَ الخيل الأفريقي، وهو مرض معدٍ لا ينتقل بالمخالطة، يصيب الخيليات بأنواعها ويُحدث اضطراباً في التنفس والدورة الدموية. يذكر دليل WOAH أن مرض الخيل الأفريقي ينقله نوعان على الأقل من Culicoides، وأن له تسعة أنماط مصلية مختلفة موصوفة. يذكر دليل WOAH أن التعادل الفيروسي هو الاختبار الذي حُددت به الأنماط المصلية التسعة المتمايزة مستضدياً لفيروس مرض الخيل الأفريقي، مع تفاعل متصالب لوحظ بين الأنماط 1 و2، و3 و7، و5 و8، و6 و9، ومن دون أي تفاعل متصالب مع فيروسات orbivirus الأخرى المعروفة. يصف دليل WOAH جسيم فيروس مرض الخيل الأفريقي بأنه جسيم غير مغلف يبلغ حجمه نحو 70 نانومتراً. يذكر دليل WOAH أن البروتينين VP2 وVP5 يشكلان القفيصة الخارجية لجسيم فيروس مرض الخيل الأفريقي، وأن البروتينين VP3 وVP7 هما البروتينان الرئيسيان في القفيصة الداخلية. يظل البروتين VP7 ثابتاً عبر الأنماط المصلية التسعة لفيروس مرض الخيل الأفريقي، ويعدّه دليل WOAH المستضد البروتيني الرئيسي في التركيب الجزيئي للفيروس.
مبدأ الاختبار
يذكر دليل WOAH أن بروتين القفيصة الخارجية الرئيسي VP2 هو أكثر بروتينات فيروس مرض الخيل الأفريقي تغيراً، وأنه محدِّد الأنماط المصلية للفيروس، ويشكّل مع البروتين VP5 هدف نشاط التعادل الفيروسي. يعتمد اختبار التعادل الفيروسي في التعرف على عزلات فيروس مرض الخيل الأفريقي الحقلية، كما يذكر دليل WOAH، على أمصال مضادة نوعية للنمط، وتستغرق نتائجه خمسة أيام أو أكثر.
الاستعمالات
يجعل دليل WOAH الفحص المختبري شرطاً أساسياً لتشخيص مرض الخيل الأفريقي، ويذكر أن علامات مرض الخيل الأفريقي السريرية وآفاته قد تشتبه، رغم خصوصيتها، بعلامات أمراض أخرى تصيب الخيل. ظل اختبار التعادل الفيروسي، بحسب دليل WOAH، الخيار المفضل لتنميط فيروس مرض الخيل الأفريقي حتى عهد قريب، وكان المرجع «الذهبي» للتعرف على العزلات المأخوذة من الحقل. يرى دليل WOAH أن اختبار التعادل الفيروسي قد تكون له قيمة إضافية في الترصد الوبائي ودراسات انتقال مرض الخيل الأفريقي، ولا سيما في المناطق المتوطنة التي يُرجّح أن توجد فيها أنماط مصلية متعددة. يربط دليل WOAH اختيار اللقاح الصحيح في فاشية مرض الخيل الأفريقي بمعرفة النمط المصلي مبكراً، ويضع التعادل الفيروسي إلى جانب تفاعل البوليميراز المتسلسل بالنسخ العكسي (RT-PCR) النوعي للنمط وتحديد التسلسل بين ما ينبغي إجراؤه لذلك في أول الفاشية قدر الإمكان. يذكر دليل WOAH أن عزل الفيروس وتحديد نمطه المصلي مهمان بشكل خاص كلما وقعت فاشيات لمرض الخيل الأفريقي خارج المناطق المتوطنة، من أجل اختيار نمط مصلي مماثل للقاح. يذكر دليل WOAH أن الأنماط المصلية 9 و4 و2 لمرض الخيل الأفريقي وُجدت في شمال أفريقيا وغربها، ومنها انتشرت أحياناً إلى البلدان المحيطة بالبحر المتوسط. يذكر دليل WOAH أن لقاحات حية مضعفة أحادية التكافؤ ومتعددة التكافؤ لمرض الخيل الأفريقي متاحة تجارياً حالياً للاستعمال في الخيل والبغال والحمير. يشير دليل WOAH إلى أن تمييز الأنماط الوراثية لفيروس مرض الخيل الأفريقي في الدم والأنسجة أصبح ممكناً بسرعة عبر صيغ من تفاعل RT-PCR النوعي للنمط، منها صيغة على الهلام وأخرى آنية بمسابر التهجين، تستهدف كلتاهما القطعة الجينية 2. يتمسك دليل WOAH بالتعادل الفيروسي مرجعاً معيارياً ينبغي أن يُحتكم إليه في تحديد النمط المصلي لعزلات فيروس مرض الخيل الأفريقي، مع أن الطرق الجزيئية تنجح في تنميط الفيروس سريعاً في عدد كبير من العينات الحقلية الإيجابية. يوضح دليل WOAH أن التغير الوراثي الذي قد يطرأ مع الوقت على جينوم فيروس مرض الخيل الأفريقي، ولا سيما في منطقة ترميز البروتين VP2 التي تُصمَّم فيها البادئات والمسابر الخاصة بمقايسات التنميط، يجعل كشف كل المتغيرات الوراثية داخل كل نمط مصلي بهذه التقنيات أمراً صعباً.
تفسير النتيجة
يحدد دليل WOAH مدة تتراوح بين ثمانية أيام واثني عشر يوماً بعد العدوى الطبيعية بفيروس مرض الخيل الأفريقي لتكوين الخيل التي تبقى على قيد الحياة أجساماً مضادة للنمط المصلي الذي أصابها. يذكر دليل WOAH أن اختبار تثبيت المتممة أداة مفيدة في المناطق المتوطنة لإظهار الأجسام المضادة من نوع IgM النوعية للمجموعة ضد فيروس مرض الخيل الأفريقي ومعايرتها، خاصة بعد عدوى أو تحصين حديثين، في حين يكشف التعادل الفيروسي الأجسام المضادة النوعية للنمط المصلي.
مكانه في المعايير الدولية
يعدّ جدول دليل WOAH لمرض الخيل الأفريقي التعادل الفيروسي مناسباً في ظروف محدودة جداً لإثبات خلو مجموعة حيوانية من العدوى، ولإثبات خلو الحيوان الفرد قبل نقله، ولتأكيد الحالات السريرية، وللترصد، وغير مناسب لدعم سياسات الاستئصال. تغيب حتى الآن، بحسب دليل WOAH، أي معايير دولية لفيروسات مرض الخيل الأفريقي أو لكواشف تشخيصه، كما لا تتوفر طريقة موحدة للتعرف على فيروس مرض الخيل الأفريقي. يجعل دليل WOAH تحليل المخاطر الحيوية أساس اختيار درجة الاحتواء المناسبة التي ينبغي أن يُعمل ضمنها على فيروس مرض الخيل الأفريقي في المختبر.