تفاعل البوليميراز المتسلسل بالنسخ العكسي في الوقت الحقيقي لإنفلونزا الطيور

أصبح تفاعل النسخ العكسي والبوليميراز المتسلسل في الوقت الحقيقي (real-time RT-PCR) الطريقةَ المختارة في كثير من المختبرات لتشخيص إنفلونزا الطيور (avian influenza) مباشرة من العينات السريرية، تشخيصًا جزئيًا على الأقل، وفق المنظمة العالمية لصحة الحيوان (WOAH). تعدّه WOAH حاليًا الطريقة المفضلة لترصد الفيروس، لأنه يقدّم تشخيصًا سريعًا وحساسًا للأنماط H5 وH7 وH9 ويتوفر بإنتاجية عالية.

ما الذي يكشفه

نُشرت مقايسات عديدة تكشف جين M (أو جين NP) بحساسية عالية، وتستوفي هذه المقايسات معايير اختبار الفرز المناسب. تُوجَّه البادئات المخصصة لتحديد النمط الفرعي نحو منطقة HA2، وهي منطقة محفوظة نسبيًا داخل جينات الراصّة الدموية (haemagglutinin) للنمطين H5 وH7.

المبدأ

يعتمد التفاعل في الغالب على طريقة المسبار المتحلل (hydrolysis probe) لتوليد إشارة التألق الخاصة بالهدف.

مقارنة بعزل الفيروس

يعطي real-time RT-PCR نتائج سريعة بحساسية ونوعية مماثلتين لعزل الفيروس.

تفسير النتيجة وحدوده

توصي WOAH بالجمع بين عدة طرق لتحديد العامل الممرض على العينة السريرية نفسها. تذكر WOAH أن الحساسية المرتفعة لـreal-time RT-PCR تؤدي إلى كشف الحمض النووي الريبي الفيروسي في عينات خالية من الفيروس المعدي، وتنبّه إلى الحذر عند تفسير النتائج ذات حدود الكشف الصغيرة التي قد لا تدل على عدوى نشطة. تشترط WOAH المصادقة على كل مجموعة من البادئات والمسابير مقابل طيف متنوع من الفيروسات، كي يصلح الاختبار لأنواع كثيرة من الطيور ولفيروسات من مناطق جغرافية وفترات زمنية واسعة.