يُستعمل اختبار تثبيت المتممة (complement fixation test, CFT) منذ سنوات طويلة في التشخيص المصلي للرعام (glanders)، وتصفه المنظمة العالمية لصحة الحيوان (WOAH) بأنه طريقة دقيقة وموثوقة لهذا الغرض في الخيليات. يعطي هذا الاختبار نتائج إيجابية خلال أسبوع واحد من العدوى، ويتعرف كذلك على أمصال الحالات المزمنة المتفاقمة.
الأنواع التي يصلح لها
يصلح CFT للخيل والبغال والإبل، وتنبّه WOAH إلى أن استعماله في الحمير يتطلب عناية خاصة لتجنب التشخيص الخاطئ.
الإجراء وقراءة النتيجة
تُمزج الأمصال والمتممة والمستضد في الصفائح وتُحضن ساعة واحدة عند 37°م. تشترط WOAH التحقق من غياب النشاط المضاد للمتممة في كل مصل، واستبعاد الأمصال المضادة للمتممة من التحليل. يدل غياب الانحلال الدموي كليًا (أي تثبيت بنسبة 100%) على نتيجة إيجابية، ويضع انحلال بنسبة 25–75% العينة في خانة الاشتباه، أما الانحلال الكامل عند التخفيف 1/5 فيعني نتيجة سلبية.
حدود الاختبار
تقرّ WOAH بأن نوعية CFT قد شُكّك فيها، وبأن نتائج إيجابية كاذبة قد تظهر فيه وقد تبقى الحيوانات إيجابية أشهرًا.
التداخل مع اختبار الملّين
قد تُظهر الخيليات السليمة غير المصابة بالرعام تفاعلًا إيجابيًا كاذبًا في CFT لفترة متفاوتة بعد إجراء اختبار الملّين (mallein) داخل الأدمة لها.