تفاعل البوليميراز المتسلسل التقليدي وفي الوقت الحقيقي للرعام

تتعرف مقايسات عديدة من تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) وPCR في الوقت الحقيقي (real-time PCR) على Burkholderia mallei مسببة الرعام (glanders)، وتفرّقها عن B. pseudomallei. تذكر المنظمة العالمية لصحة الحيوان (WOAH) أن النتيجة الإيجابية في PCR في الوقت الحقيقي تؤكد حتى اليوم تشخيص B. mallei للعزلة وتشخيص الرعام في الحالات السريرية.

العينة

تُقطَّع بالمشرط عينات أنسجة الخيل (الجلد والرئة والغشاء المخاطي لقرينات الأنف وحاجزه والكبد والطحال)، بعد تعطيلها وحفظها في الفورمالين (48 ساعة، 10% حجم/حجم)، إلى قطع بحجم 0.5 × 0.5 سم (نحو 500 ملغ). تُنقل المستعمرات المفردة من طبق الآغار إلى 200 ميكرولتر من الماء منزوع الأيونات.

ضبط الجودة

يُعطَّل أي تلوث محتمل بنواتج تضخيم من تفاعلات سابقة بخطوة حضن أولية باستعمال إنزيم يوراسيل N-غليكوزيلاز (uracil N-glycosylase). تشترط WOAH إدراج شواهد خالية من القالب تحتوي ماءً مخصصًا لـPCR، وشواهد إيجابية تحتوي الحمض النووي لـB. mallei، في كل تشغيل، لكشف التلوث بنواتج التشغيلات السابقة أو فشل التضخيم.

الأداء

قُيّمت مقايسة PCR تقليدية وأخرى في الوقت الحقيقي على عينات من فاشية طبيعية للرعام في الخيل، وترى WOAH أن المقايستين تحتاجان إلى دراسات مشتركة بين المختبرات لتأكيد متانتهما.

تفسير النتيجة وحدوده

تبقى حساسية مقايسات PCR على العينات السريرية مجهولة، ولذلك لا تعدّ WOAH النتيجة السلبية دليلًا على غياب B. mallei من العينة، وتشترط تطبيق وسائل تشخيصية أخرى للتأكيد. قد يؤدي التطور الجيني مستقبلًا إلى ظهور نسائل من B. mallei لا تكشفها مقايسات PCR القياسية هذه.

مقارنة بالاختبارات الأخرى

يشترك PCR مع الزرع في الكشف عن كائن الميليودوسيس (melioidosis; B. pseudomallei) والتعرف عليه لتأكيد الحالات السريرية، وقد تثبت طرق PCR فائدتها أيضًا في فحص العينات الملوثة.