اختبار اللطخة الغربية للرعام

يُعدّ اختبار اللطخة الغربية (western blotting)، أو اللطخة المناعية (immunoblot)، القائم على مستحضر خام معالَج بالفورمالين من مستضدات Burkholderia mallei مأخوذة من عزلات مناطق جغرافية مختلفة، مقايسةً حساسة ونوعية للتشخيص المصلي للرعام (glanders). تستهدف اللطخة الغربية للرعام، بحسب المنظمة العالمية لصحة الحيوان (WOAH)، أن تكون اختبارًا أعلى حساسية من اختبار تثبيت المتممة (CFT) يُعاد به فحص الأمصال الإيجابية كاذبًا في CFT في المناطق غير الموبوءة.

المبدأ

تُفصل المستضدات بالرحلان الكهربائي في هلام متعدد الأكريلاميد مع كبريتات دوديسيل الصوديوم (SDS-PAGE)، وتُنقل بعد ذلك إلى أغشية النيتروسليلوز. تُظهَر الأجسام المضادة لعديد السكاريد الشحمي (LPS) لـB. mallei المتفاعلة مع المستضد على شريط اللطخة بمقترن فوسفاتازي خاص بنوع الحيوان وبنظام اللون NBT-BCIP.

قراءة النتيجة

تُسجَّل اللطخة إيجابية إذا ظهر بوضوح نمط أشرطة سلّم LPS الخاص بـB. mallei في المنطقة بين 20 و60 كيلودالتون، ومشتبهًا فيها عند تفاعل لوني ضعيف، وسلبية عند غياب أي تفاعل.

الأداء وحدوده

شُخّصت جميع الحيوانات الإيجابية والسلبية تشخيصًا صحيحًا عند فحص 171 مصلًا من خيول وبغال مصابة بالرعام من باكستان والبرازيل و305 أمصال من خيول ألمانية سلبية، مع أن الاختبار لم يُصادق عليه بالكامل حتى الآن. طُوّرت اختبارات لطخة مناعية للتشخيص المصلي للرعام، وتعذّرت مواصلة المصادقة عليها لغياب لوحة أمصال إيجابية شاهدة. لا تستطيع اللطخة الغربية التفريق بين عدوى الرعام وعدوى الميليودوسيس (melioidosis)، ولم تُقيَّم بعد في الحمير لقلة الأمصال الإيجابية الشاهدة المتاحة.

مقارنة بالاختبارات الأخرى

تقوم اللطخة الغربية على مستحضرات مستضدية خام من سلالات B. mallei بوغور (Bogor) وزغرب (Zagreb) وموكتسوار (Mukteswar)، وهي السلالات نفسها التي تستند إليها معظم تركيبات مستضد CFT.