ما الذي يكشفه
يكشف هذا الاختبار جينوم فيروس إنفلونزا الخيول في الإفرازات التنفسية، في حين يُترك الكشف عن المستضد الفيروسي لاختبار ELISA لالتقاط المستضد. وتُستعمل صيغتا RT-PCR التقليدية والآنية (real-time) بصورة روتينية للبحث عن المادة الوراثية للفيروس في الإفرازات الأنفية.
العينة
وتختلف المصادر في التوقيت الأمثل: يفضّل دليل WOAH الجمع خلال 3-5 أيام من ظهور العلامات، بينما يذكر دليل Merck نحو 1-2 يوم من بدء المرض.
المبدأ
والتقنية المستعملة هي تفاعل البوليميراز المتسلسل بالنسخ العكسي (reverse-transcription polymerase chain reaction, RT-PCR)، ويُوجَّه إلى جينوم الفيروس. وإلى جانبه طُوّرت تقنية التضخيم متساوي الحرارة بوساطة الحلقة بعد النسخ العكسي (RT-LAMP) لكشف جين الراصّة الدموية في النمطين H3N8 وH7N7، وتصفها إحدى المراجعات بأنها أعلى حساسية من RT-PCR.
متى يُستخدم
يعدّ دليل Merck مصفوفة PCR على المسحات الأنفية البلعومية خلال الطور الحاد الوسيلة الرئيسة لتشخيص المرض. ويذكر الدليل نفسه أن التشخيص المؤكد يُبنى في الغالب على عزل الفيروس أو على مصفوفة RT-PCR. وعندما تكون الموارد شحيحة، تساعد النتائج الإيجابية لاختباري RT-PCR وELISA في انتقاء العينات التي تستحق محاولة عزل الفيروس منها. وتوصي WOAH بالجمع بين أكثر من طريقة لتحديد العامل على العينة السريرية نفسها.
تفسير النتيجة
بحسب WOAH، يتفوق RT-PCR في الحساسية على استزراع الفيروس في البيض. ويبقى الحمض النووي الريبي الفيروسي قابلًا للكشف بـ PCR مدة 15 يومًا أو أكثر، وهي مدة تتجاوز فترة طرح الفيروس التي تقدَّر بنحو 7-10 أيام. لكن للاختبار حدًّا: فدراسة الخصائص المستضدية للعزلات الجديدة وتقييم الانجراف المستضدي في الميدان يتطلبان عزل الفيروس المعدي نفسه، حتى وإن أمكن استخلاص التسلسل الجيني للعزلات من PCR.