وُصف اختبار التراص المباشر (direct agglutination test, DAT) لتشخيص داء الليشمانيات الحشوي (visceral leishmaniosis, VL) وداء الليشمانيات الكلبي (canine leishmaniosis, CanL)، وهما شكلان من داء الليشمانيات (leishmaniosis; Leishmania spp.). جرى التحقق من صلاحية DAT بعد تحسينه بوصفه اختبارًا نوعيًا وحساسًا للتحريات الميدانية.
المبدأ
يُلوَّن مستضد DAT بأزرق كوماسي اللامع (Coomassie brilliant blue) بتركيز 0.02%، ويتكون من أشكال سوطية (promastigotes) تُجمع من المزارع وتُغسل في PBS بدرجة حموضة 7.2 وتُعالج بالتربسين بتركيز 0.4%.
طريقة العمل
تُترك صفيحة DAT مدة 18 ساعة في حرارة الغرفة بعد أن تُحضَّر في آبارها ذات القاع على شكل V تخفيفات مضاعفة متسلسلة من المصل في PBS، ويُضاف إلى كل بئر 50 ميكرولتر من المستضد، وتُرجّ الصفيحة يدويًا بحذر. تحسّنت موثوقية DAT بمعالجة الأمصال بـ 2-ميركابتوإيثانول بتركيز 0.2 مولار وحضنها في 37 درجة مئوية.
تفسير النتيجة
يُقرأ DAT بالعين على خلفية بيضاء، وتظهر التفاعلات الموجبة تكتلات زرقاء فاتحة مميزة، بينما تعطي العينات السالبة بقعة زرقاء واضحة حادة الحواف.
الأداء
بلغت حساسية DAT المعدّل لكشف الأضداد النوعية لدى الكلاب الخازنة 100% ونوعيته 98.9%، ويُعدّ شديد الملاءمة للعمل الوبائي والبيئي الميداني الواسع ولتشخيص CanL.
الاختبارات المصلية الأكثر توفرًا
يُعدّ DAT من أكثر الاختبارات المصلية لداء الليشمانيات توفرًا، إلى جانب اختبار التألق المناعي غير المباشر (IFAT) واختبار ELISA والاختبار المناعي الكروماتوغرافي السريع.