ما الذي يكشفه
يُستعمل تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) روتينيًا لكشف أفراد معقّد المتفطرة السلية في العينات السريرية لدى الإنسان، وأغلبها من القشع (sputum)، ويتزايد تطبيقه في تشخيص السل لدى الحيوانات، ويستطيع أحيانًا التعرف على المسبب مباشرة في العينات السريرية.
المبدأ
يستهدف التفاعل تسلسلات نوعية للمعقّد مثل 16S-23S rRNA، وأكثر أهدافه شيوعًا عناصر الإدخال متعددة النسخ (multicopy insertion elements) IS6110 أو IS1081 أو كلاهما.
العينة
لمعالجة العينة قبل التحليل، من إزالة التلوث واستخلاص الحمض النووي والتخلص من مثبطات إنزيم البوليميراز، أثر كبير في أداء المقايسة، ومن الأمور الجوهرية أن تشمل طريقة استخلاص الحمض النووي (DNA) خطوة تحلل ميكانيكي إلى جانب التحلل الكيميائي.
متى يُستخدم
يمتاز PCR بالسرعة ويفيد حين يصعب إنماء الجرثومة، لكنه أقل حساسية من الزرع إذا كانت الجراثيم في العينة قليلة، وكثيرًا ما تثير القلقَ النتائجُ الإيجابية الكاذبة، والنتائج السلبية الكاذبة في العينات القليلة العصيات.
تفسير النتيجة
أظهرت مقايسات real-time PCR المنشورة لكشف الهدفين IS6110 وIS1081 أداءً بين الجيد والممتاز قياسًا بالزرع أو بالفحص النسيجي المرضي، في حين كثيرًا ما لا تؤدي العبوات التجارية والطرق المطوّرة داخل المختبرات (in-house) أداءً جيدًا في المقارنات بين المختبرات، على أنسجة طازجة كانت أو مجمدة أو محفوظة بحمض البوريك، فقد تحتاج إلى تحقق إضافي من صلاحيتها ضمانًا للدقة.
مكانه في دليل WOAH
يوصي دليل المنظمة العالمية لصحة الحيوان (WOAH) بشدة بأربعة ضوابط تجعل التعرّف الجزيئي الجيني على أفراد المعقّد موثوقًا:
- اعتماد إجراءات تشغيل قياسية (standard operating procedures)؛
- شواهد (controls) داخلية وخارجية لكلٍّ من خطوتي الاستخلاص والتضخيم؛
- إجراءات تحول دون التلوث المتصالب (cross-contamination)؛
- تطبيق مقايسات real-time PCR في أنبوب مغلق (closed tube).