ما الذي يكشفه الاختبار
يستهدف هذا الاختبار جين N بتفاعل البوليميراز المتسلسل بالنسخ العكسي (RT-PCR) أحادي الخطوة، مستنداً إلى البروتوكول الأولي الذي وصفه Couacy-Hymann وزملاؤه (2002)، وبالبادئات (primers) الموصوفة له يستطيع التفاعل التقليدي كشف السلالات الوراثية (lineages) الأربع جميعها لفيروس طاعون المجترات الصغيرة (PPRV)، أما بادئات أخرى تستهدف الجين نفسه فيمكن استعمالها لكنها قد لا تناسب هذا الغرض.
العينة والمتطلبات
ينص دليل المنظمة العالمية لصحة الحيوان (WOAH) على أن الحمض النووي الريبي يُنقّى أولاً في جميع الحالات من عينات الدم أو الأنسجة، أما تجهيزات الاختبار فتشمل عدة RT-PCR أحادية الخطوة والبادئات المناسبة وماءً مقطراً وجهاز تدوير حراري (thermal cycler)، فضلاً عن كواشف الرحلان الكهربائي على هلام الآغاروز ومعداته.
تفسير النتيجة
يقضي دليل WOAH بإدراج شاهد سلبي في كل مجموعة من اختبارات PCR، يحلّ فيه 5 ميكرولترات من الماء المقطر محل الحمض النووي الريبي، ويُقرأ الناتج بتحليل 10 ميكرولترات منه بالرحلان الكهربائي على هلام آغاروز بتركيز 1.5%، ويبلغ طول ناتج التضخيم 351 زوجاً قاعدياً (bp). ومن كل عينة إيجابية يمكن استعمال 40 ميكرولتراً من الناتج النهائي مباشرةً في تحديد التسلسل (sequencing).
صيغ أخرى مبلَّغ عنها
من الصيغ الأخرى المبلَّغ عنها شكلٌ آخر من RT-PCR القائم على جين N وصفه Saravanan وزملاؤه (2004)، وتفاعل RT-PCR متعدد (multiplex) أبلغ عنه George وزملاؤه (2006) يضخّم أجزاءً من جينَي البروتينين N وM.