ما الذي يكشفه أو يقيسه
يقيس اختبار تثبيط البؤر المتألقة السريع (rapid fluorescent focus inhibition test, RFFIT) قدرة المصل على تحييد فيروس داء الكلب، ويُستخرج منه عيار الأضداد بالوحدات الدولية لكل مليلتر (IU/ml)، ونتائجه مكافئة لنتائج اختبار تحييد الفيروس بالتألق (FAVN).
العينة
لتعطيل المتممة (complement)، تُسخَّن عينات المصل قبل فحصها ثلاثين دقيقة عند 56°م.
المبدأ
الجرعة المكوّنة للبؤر (focus-forming dose, FFD50) هي وحدة الفيروس في هذا الاختبار، وتقابل التخفيف الذي تظهر عنده بؤرة أو أكثر من الخلايا المصابة في نصف الحقول المجهرية المفحوصة. ويمكن إجراؤه بإحدى صيغتين:
- اختبار نقطة نهاية بأربعة تخفيفات؛
- أو فرز بتخفيفين فقط، والتخفيفان 1/5 و1/50 كافيان للتقييم الروتيني لفعالية التحصين.
ويصح إجراؤه على خلايا BHK-21 عوضًا عن خلايا الورم الأرومي العصبي (neuroblastoma). وفي كل اختبار يُدرج المختبر شاهدين من المصل يحضّرهما بنفسه: موجبًا مخففًا إلى فاعلية 0.5 وحدة دولية لكل مليلتر، وسالبًا فاعليته أقل من 0.1 وحدة دولية لكل مليلتر.
تفسير النتيجة
تُحدَّد نقطة النهاية بإحدى طريقتين:
- عيار 50%: يعادل خفضًا بنسبة 97% في كمية الفيروس الملقَّحة، ويُعبَّر عنه بعامل تخفيف أعلى تخفيف للمصل تحتوي عنده نصف الحقول المجهرية المرصودة على خلية مصابة واحدة أو أكثر؛
- عيار التحييد الكامل (100%): تُعرَف نقطته بغياب الخلايا المصابة من كل الحقول المرصودة، ويُسجَّل عندها أعلى تخفيف للمصل حُيِّد فيه فيروس التحدي الملقَّح بأكمله.
وأيًّا كانت الطريقة المتبعة من الطريقتين، يُدرج في كل اختبار مصل قياسي مرجعي معترف به، ويمكن بمقارنة عيار المصل المفحوص بعياره استخراج عيار الأضداد بالوحدات الدولية لكل مليلتر.