يكشف تفاعل البوليميراز المتسلسل بالنسخ العكسي (reverse-transcription polymerase chain reaction, RT-PCR) الحمض النووي الريبي (RNA) لفيروس حمى الوادي المتصدع (RVFV)، ويتيح تشخيصًا سريعًا بصيغتيه التقليدية والآنية (real-time) المتحقق منهما. وقد أثبتت هاتان التقنيتان فائدة كبيرة خلال فاشيات المرض، ويمكن استعمالهما أيضًا للكشف عن RNA الفيروس في مجموعات البعوض.
المبدأ
تمر المقايسة التقليدية بأربع خطوات متعاقبة تبدأ باستخلاص RNA من العينة أو الشاهد وتنتهي بكشف النواتج بالرحلان الكهربائي على هلام الأغاروز، ويتوسطهما النسخ العكسي وتضخيم ناتجه. وتعتمد بعض المختبرات المرجعية للمنظمة العالمية لصحة الحيوان (WOAH) صيغة الهلام هذه، مستعملةً بروتوكول RT-PCR المتداخل (nested) ذا الخطوتين الذي وضعه Sall وزملاؤه (2001). ويمكن للصيغة الآنية أن تستعمل إجراءات الاستخلاص والنسخ العكسي نفسها المتبعة في الصيغة التقليدية.
تفسير النتيجة
في الصيغة التقليدية تدل حزمة طولها 810 أزواج قواعد (242 للسلالة Clone 13) على نتيجة إيجابية، وهي تقابل تسلسلًا من منطقة ترميز NSs في القطعة S من جينوم الفيروس. أما في الصيغة الآنية فتُسنَد قيمة دورة العتبة (threshold cycle, CT) لكل تفاعل من منحنيات التضخيم، وقد تناسب أنواعَ العينات المختلفة قيمُ قطع مختلفة. وتوجد طرق بديلة تستهدف القطعتين S وL من الجينوم.
مقارنة بالاختبارات الأخرى
يُعدّ RT-PCR من الاختبارات التأكيدية التي يُؤكَّد بها التشخيص الأولي بجهاز التدفق الجانبي (LFD)، ويُفضَّل مع التلوين المناعي لتأكيد عزل الفيروس في مزارع الخلايا.
حدود الاختبار
تنص المنظمة العالمية لصحة الحيوان على وجوب التحقق من صلاحية طرق الاختبار الموصوفة في كل مختبر يستخدمها.