تكشف لطخة ويسترن المناعية (Western immunoblot) بروتين البريون المقاوم للهضم (PrPres)، وتصلح لكشف عينات مرض السكرابي (scrapie) بشكليه التقليدي (classical) واللانمطي (atypical). تلجأ بعض المختبرات إلى لطخة ويسترن المناعية، متى توفر نسيج كافٍ، لتأكيد العينات ضعيفة الإيجابية التي يكشفها اختبار سريع أولًا.
المبدأ
تعتمد تقنيات لطخة ويسترن المناعية كافة على استخلاص بالمنظفات (detergent) يتبعه هضم بإنزيم البروتيناز K (proteinase K) يزيل بروتين المضيف الطبيعي (PrPc). تستخدم تقنيات لطخة ويسترن المناعية المحسّنة لكشف السكرابي اللانمطي تركيزًا مخفضًا من البروتيناز K، وتعزو المنظمة العالمية لصحة الحيوان ذلك إلى أن PrPSc في السكرابي اللانمطي أضعف مقاومة لهذا الهضم من PrPSc في السكرابي التقليدي.
الإجراء والعينة
وُضعت «تقنية المنظمة العالمية لصحة الحيوان للطخة ويسترن المناعية» أصلًا لتشخيص اعتلال الدماغ الإسفنجي البقري (BSE)، وتستعمل كمية كبيرة من الدماغ الطازج تبلغ اسميًا 2–4 غرامات. ترفع تقنية المنظمة العالمية لصحة الحيوان للطخة ويسترن المناعية كمية PrPres أو تركيزه بالطرد المركزي الفائق (ultracentrifugation) لقطعة الدماغ الكبيرة، وتذكر المنظمة أن هذه الزيادة يمكن أن تحسّن الحساسية. يمكن تطبيق طريقة لطخة ويسترن المناعية بنجاح على نسيج مثبت بالفورمالين، مع إدخال تعديل عليها.
تفسير النتيجة
يُشخَّص السكرابي التقليدي بلطخة ويسترن المناعية بشرط ظهور أشرطة PrPres بين 17 و27 كيلودالتون في مسارات العينات المعالجة بالبروتيناز K دون غيرها، مع مسارات شواهد توفر مقارنة مناسبة. يظهر السكرابي اللانمطي، المعروف أيضًا باسم Nor98، في لطخة ويسترن المناعية على هيئة أشرطة متعددة تتراوح تقريبًا بين 11 و31 كيلودالتون.
مقارنة بالاختبارات الأخرى
يستند تفسير لطخة ويسترن المناعية، ومعها مقايسة الممتز المناعي المرتبط بالإنزيم (ELISA)، في التفريق بين اعتلال الدماغ الإسفنجي البقري والسكرابي إلى اختلاف موقع القطع الطرفي الأميني (N-terminal) لبروتين PrPSc عند هضمه بالبروتيناز K. تبقى لطخة ويسترن المناعية والاختبارات السريعة الخيارين المتاحين بحسب المنظمة العالمية لصحة الحيوان عندما يتعذر الحصول على نتائج الفحص النسيجي المرضي والكيمياء النسيجية المناعية بسبب تحلل العينة الذاتي الشديد.
حدود الاختبار
تشير أدلة أوردتها المنظمة العالمية لصحة الحيوان إلى أن تعدد أشكال بروتين البريون في الماعز (PrP polymorphisms) قد يؤثر في أداء لطخة ويسترن المناعية تبعًا للجسم المضاد المستعمل.