تفاعل البوليميراز المتسلسل للأنابلازما (Anaplasma PCR) اختبار جزيئي يكشف المادة الوراثية لجراثيم Anaplasma، ويذكر دليل MSD البيطري أن إجراءه على عينات الدم أو رشافات الأعضاء قد يفيد كثيراً في تشخيص داء الأنابلازما في الكلاب بعد العدوى بوقت قصير، لأن المادة الوراثية تُكشف عادةً خلال الأسبوع الأول. يذكر فصل أنابلازما الأبقار في دليل المنظمة العالمية لصحة الحيوان (WOAH) لحيوانات اليابسة أن الاختبارات القائمة على الحمض النووي كثيراً ما تُستعمل في مختبرات التشخيص وفي التجارب، وأنها قادرة على كشف العدوى منخفضة المستوى في الأبقار الحاملة وفي القراد الناقل.
ما الذي يكشفه الاختبار
يصف دليل MSD البيطري داء الأنابلازما في الكلاب بأنه أمراض ينقلها القراد وتسببها جرثومة إلزامية التطفل داخل الخلايا، تصيب العدلات أو الصفائح بحسب نوعها (Anaplasma phagocytophilum أو Anaplasma platys). يذكر فصل أنابلازما الأبقار لدى WOAH أن Anaplasma phagocytophilum قد تسبب مرضاً محدوداً ذاتياً في الأبقار، وأنها تسبب في شمال أوروبا الحمى المنقولة بالقراد التي تصيب الحملان في المقام الأول. يصف فصل أنابلازما الأبقار لدى WOAH البروتين السطحي الرئيسي 5 (MSP5) بأنه بروتين سائد مناعياً تعبّر عنه Anaplasma marginale وAnaplasma ovis وAnaplasma centrale.
العينة
يذكر فصل أنابلازما الأبقار لدى WOAH أن أكثر المقايسات استشهاداً لكشف Anaplasma marginale في الحيوان الفرد تستعمل مسباراً لزيادة النوعية، وتستهدف الجين msp1b أو الجين msp5 في الحمض النووي الجينومي المستخلص من الدم الكامل.
مبدأ الاختبار
يذكر فصل أنابلازما الأبقار لدى WOAH أن تفاعل البوليميراز المتسلسل التقليدي المتداخل استُعمل لتحديد الحيوانات الحاملة ذات العدوى المنخفضة مع احتمال حدوث تضخيم غير نوعي، وأنه يستغرق وقتاً لأنه يتطلب تفاعلين كاملين، ويطرح مشكلات كبيرة في ضبط الجودة عند الاستعمال الروتيني. يرى فصل أنابلازما الأبقار لدى WOAH أن مقايسات PCR الآني تعادل PCR المتداخل في الحساسية التحليلية وأنها مفضّلة في بيئة التشخيص للحد من خطر التلوث بنواتج التضخيم، ويضيف أن PCR الآني يجري التضخيم والتحليل في أنبوب واحد مغلق ويعطي نتيجة شبه كمية. ينبّه فصل أنابلازما الأبقار لدى WOAH إلى أن معدات PCR الآني وكواشفه باهظة الكلفة، وقد تتجاوز إمكانات بعض المختبرات. يذكر فصل أنابلازما الأبقار لدى WOAH أن مقايسة PCR الآني التي طوّرها Carelli وزملاؤه يمكن استعمالها أيضاً في تفاعل ثنائي لكشف Anaplasma centrale وAnaplasma marginale والتمييز بينهما. تذكر دراسة Huggins وزملائه (2021) في مجلة Microorganisms أن التقنيات الجزيئية، ومنها PCR التقليدي وPCR الآني، تُستعمل اليوم بانتظام لتشخيص العوامل الممرضة المنقولة بالنواقل في الكلاب، لقدرتها على كشف مستويات منخفضة من الحمض النووي الجائل للعامل الممرض مع تمييز دقيق بين الأنواع.
الاستعمالات
يذكر دليل MSD البيطري أن فحص لطاخات الدم قد يكشف التوتيّات داخل العدلات في عدوى Anaplasma phagocytophilum أو داخل الصفائح في عدوى Anaplasma platys، وأن العدوى بـAnaplasma phagocytophilum لا تتميز خلوياً عن العدوى بـE. ewingii. يعدّ دليل MSD البيطري تفاعل البوليميراز المتسلسل، في داء الأنابلازما لدى الكلاب، الطريقة الوحيدة التي تتيح تحديد نوع الكائن المسبب للعدوى.
تفسير النتيجة
يذكر فصل أنابلازما الأبقار لدى WOAH أن PCR المتداخل استُعمل لتحديد الأبقار الحاملة لـAnaplasma marginale بقدرة على كشف ما لا يزيد على 30 كرية حمراء مصابة في المليلتر من الدم، وهو أدنى بكثير من أقل المستويات لدى الحاملين، وأن الحساسية التحليلية لطرق PCR قُدّرت بنسبة 0.0001% من الكريات الحمراء المصابة، مع أن جزءاً فقط من الأبقار الحاملة يُكشف عند هذا المستوى. يذكر فصل أنابلازما الأبقار لدى WOAH أن مقايسة Anaplasma centrale، حين طُبّقت على 51 عينة حقلية من أبقار في إيطاليا، كانت أقل حساسية تحليلية من PCR المتداخل، وأن نتائج المقايسة الثنائية تعارضت في 4 من 51 عينة مع اختبار اللطخة الخطية العكسية الخاص بـAnaplasma centrale. ينبّه فصل أنابلازما الأبقار لدى WOAH إلى أن أنواع Anaplasma وEhrlichia القريبة تحمل كلها نظائر لجين msp5 تتطابق بنسبة 50% مع جين من Ehrlichia ruminantium، ولذلك يجب تحديد نوعية المقايسة في عينات المختبر والحقل. يذكر فصل أنابلازما الأبقار لدى WOAH أن الأجسام الاشتمالية لـAnaplasma marginale لا تُكشف بسهولة في لطاخات الدم بعد مرحلة الريكتسيا الحادة إلا في انتكاسات صغيرة عرضية، وأن PCR ذا النقطة النهائية قد لا يكشف العامل الممرض في عينات دم الحاملين عديمي الأعراض. يدعو فصل أنابلازما الأبقار لدى WOAH إلى توخي الحذر عند الاعتماد على تقنيات الحمض النووي وحدها في تشخيص Anaplasma marginale لدى الأبقار المصابة بفقر الدم. يذكر فصل أنابلازما الأبقار لدى WOAH أن كشف الحمض النووي للعامل الممرض داخل القرادة لا يكفي لتحديد قدرة نوع معين من القراد على نقل ذلك العامل. يشير فصل داء الإرليخيا في الكلاب من دليل MSD البيطري إلى أن حساسية تفاعل البوليميراز المتسلسل قد تقصر أحياناً إذا كان عدد الكائنات قليلاً أو كان المريض قد تلقى مضادات للميكروبات.
مكانه في المعايير الدولية
توصي المنظمة العالمية لصحة الحيوان (WOAH) في فصل أنابلازما الأبقار بالجمع بين عدة طرق للتعرف على العامل الممرض تُطبَّق على العينة السريرية الواحدة. يذكر فصل أنابلازما الأبقار لدى WOAH أن اختبارات قائمة على الحمض النووي طُوّرت لكشف Anaplasma marginale في الأبقار المصابة، وإن لم يُصادَق عليها مصادقة كاملة.