الكشف عن المستضد (Antigen detection) في تعفن الدم النزفي مجموعة من الاختبارات المصلية التي تحدد النمط المصلي لعزلات Pasteurella multocida، وهي بحسب دليل المنظمة العالمية لصحة الحيوان (WOAH) الطريقة المعتادة لتعرّف النمط المصلي المحدد. يصف دليل WOAH تعفن الدم النزفي بأنه مرض رئيسي يصيب الأبقار والجواميس ويتسم بتسمم دموي حاد شديد الفتك، مع معدلات مرتفعة للمراضة والنفوق.
ما الذي يكشفه الاختبار
يذكر فصل تعفن الدم النزفي في دليل WOAH أن المرض تسببه بكتيريا Pasteurella multocida، وهي عُصيّة مكوّرة سلبية الغرام تعيش في الغالب متعايشة في البلعوم الأنفي للحيوانات. تنحصر الأنماط المصلية من Pasteurella multocida التي يذكر دليل WOAH أنها تسبب تعفن الدم النزفي جغرافياً في بعض مناطق آسيا وأفريقيا والشرق الأوسط وجنوب أوروبا. يحمّل دليل WOAH المسؤولية الرئيسية عن تعفن الدم النزفي للنمط المصلي الآسيوي B:2 والنمط الأفريقي E:2 وفق نظام Carter وHeddleston، وهما يقابلان 6:B و6:E في نظام Namioka وCarter.
العينة
عينة عزل Pasteurella multocida في تشخيص تعفن الدم النزفي، بحسب دليل WOAH، هي في العادة دم الحيوان النافق أو نخاع عظمه، ومنها تُعزل البكتيريا بالطرق الزرعية والحيوية قبل تعرّفها كيميائياً حيوياً ومصلياً وجزيئياً. يجيز دليل WOAH استعمال نخاع العظام الطويلة، كعظم العضد والفخذ والظنبوب، لعزل البكتيريا إذا مضى على نفوق الحيوان وقت طويل. يوضح دليل WOAH أن التسمم الدموي الحقيقي في تعفن الدم النزفي يحدث في المرحلة الأخيرة من المرض، ولذلك ينبغي أخذ عينات الدم من الحيوانات المريضة قبيل نفوقها مباشرة.
مبدأ الاختبار
يذكر دليل WOAH عدة اختبارات مصلية لتعرّف الأنماط المصلية المسببة لتعفن الدم النزفي من Pasteurella multocida، يخدم بعضها التنميط «المحفظي» كالتلازن الدموي غير المباشر، وبعضها التنميط «الجسدي» كالانتشار المناعي في هلام الآغار، إلى جانب التلازن السريع على الشريحة والتلازن بخلايا معالجة بالحمض. تُحضَّر الأمصال المضادة مفرطة المناعة لمعظم اختبارات التنميط المصلي لـ Pasteurella multocida، وفق دليل WOAH، في الأرانب ضد سلالات مرجعية محددة. يصف دليل WOAH في اختبار التلازن السريع على الشريحة للتنميط المحفظي ظهور تلازن خشن ندفي خلال 30 ثانية، وينبّه إلى أن المزارع القديمة قد تعطي تلازناً حبيبياً ناعماً يتأخر ظهوره. يذكر دليل WOAH أن اختبار التلازن الدموي غير المباشر للتنميط المحفظي أُجري في الأصل بكريات دم حمراء بشرية من الزمرة O محسّسة بالمستضد، ثم استُعملت كريات دم الأغنام في السنوات الأحدث. يوضح دليل WOAH أن اختبارات الانتشار المناعي في هلام الآغار تُستعمل للتنميط «المحفظي» والتنميط «الجسدي» بحسب المستضدات والأمصال المضادة المستعملة، وأنها تعتمد تقنية الانتشار المزدوج. يقدّم دليل WOAH الرحلان الكهربائي المناعي المعاكس طريقةً سريعة لتعرّف مزارع النمطين المحفظيين B وE.
الاستعمالات
يبني دليل WOAH تشخيص تعفن الدم النزفي على العلامات السريرية والآفات العيانية وأنماط المراضة والنفوق، ويشترط للتأكيد عزل العامل الممرض وتوصيفه بالتقنيات التقليدية والجزيئية. يذكر دليل WOAH أن عزلات Pasteurella multocida في تعفن الدم النزفي يمكن تأكيدها بالتقنيات الجزيئية. يرى دليل WOAH أن اختبار التلازن الدموي غير المباشر يمكن أن يُستعمل لتنميط السلالات المجهولة، لكنه أكفأ مع النمطين المصليين B وE وأكثر موثوقية بوصفه اختباراً كمياً ضد هذه السلالات. يذكر فصل تعفن الدم النزفي في دليل WOAH أن الاختبارات المصلية التي تكشف الأجسام المضادة لا تُستعمل في العادة للتشخيص.
تفسير النتيجة
يُحكم على اختبار التلازن الدموي غير المباشر، وفق دليل WOAH، بمظهر الكريات الحمراء: تلازنها الخشن نتيجة إيجابية وتجمعها في زر مركزي نتيجة سلبية، وتُسجَّل القراءة الأولى بعد ساعتين والنهائية بعد 18 ساعة. تُنسب السلالة المجهولة في اختبار التلازن الدموي غير المباشر، بحسب دليل WOAH، إلى المصل مفرط المناعة الذي يحدث معه التلازن، وتُعدّ غير قابلة للتنميط إذا لم يحدث تلازن مع أي من الأمصال. يذكر دليل WOAH في التنميط الجسدي بالانتشار المناعي في هلام الآغار أن جميع الأنماط المصلية لتعفن الدم النزفي، الآسيوية والأفريقية، تتفاعل مع المصل المضاد للنمط 2، وأن تفاعلات متصالبة قد تحدث مع النمط 5. تُعدّ النتيجة إيجابية في الرحلان الكهربائي المناعي المعاكس، وفق دليل WOAH، عند ظهور خط واضح بين حفرة المستضد وحفرة المصل المضاد. يعدّ دليل WOAH التلازن الحبيبي الناعم في اختبارات تلازن المستضد الجسدي دليلاً على تلازن جسدي نوعي. يؤكد دليل WOAH أنه لا يمكن الوصول إلى تشخيص قاطع لتعفن الدم النزفي بالفحص المجهري المباشر وحده.
مكانه في المعايير الدولية
يمنح جدول طرق التشخيص في فصل تعفن الدم النزفي من دليل WOAH الكشف عن المستضد ثلاث علامات زائد، ومعناها في مفتاح الجدول «موصى به لهذا الغرض»، لغرض واحد، وعلامة زائد واحدة، أي «مناسب في ظروف محدودة جداً»، لغرضين، وعلامة ناقص، أي «غير مناسب لهذا الغرض»، للأغراض الثلاثة الباقية. يقيّم جدول طرق التشخيص في فصل تعفن الدم النزفي من دليل WOAH الرحلان الكهربائي المناعي المعاكس بثلاث علامات زائد لغرض واحد وعلامة زائد واحدة لثلاثة أغراض وعلامة ناقص لغرضين. يذكر دليل WOAH أن هناك اتفاقاً عاماً على أن تسمية الأنماط المصلية لـ Pasteurella multocida ينبغي أن تقوم على الجمع بين المستضد الجسدي والمستضد المحفظي. يشير دليل WOAH إلى نظامين شائعين للتسمية، هما نظام Namioka وCarter الذي يسمي الأنماط الآسيوية والأفريقية لتعفن الدم النزفي 6:B و6:E، ونظام Carter وHeddleston الذي يسميها B:2 وE:2. يذكر دليل WOAH أنه لا توجد تقارير مؤكدة عن إصابة الإنسان بالنمطين B:2 وE:2 من Pasteurella multocida، لكن أنماطاً مصلية أخرى تصيب الإنسان، وأنه ينبغي اتخاذ احتياطات لتجنب التعرض لها.